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[发明专利]一种3β-羟基甾体脱氢酶及其在制备去氢表雄酮中的应用-CN202211028698.9有效
发明人：林娟;苏冰梅;师艺冰;许炼;许鑫琦 -专利权人：福州大学
申请日： 2022-08-25 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种3β‑羟基甾体脱氢酶SfSDR及其在制备去氢表雄酮中的应用。本发明将3β‑羟基甾体脱氢酶SfSDR与葡萄糖脱氢酶BtGDH在大肠埃希氏菌中共表达，并以共表达工程菌的静息细胞作为生物催化剂协同酯酶Z03共同催化3‑乙酰氧基‑△3,5‑雄甾二烯‑17‑酮合成去氢表雄酮。该生物催化剂具有较高的催化活性、区域选择性和立体选择性，可以在6 h以内完全转化32.8 g/L的3‑乙酰氧基‑△3,5‑雄甾二烯‑17‑酮生成目标产物去氢表雄酮，无需添加有机溶剂且无副产物产生，经过分离纯化，产物回收率高达95%以上，说明该生物催化剂是去氢表雄酮绿色合成的高效催化剂。
一种羟基脱氢酶及其制备去氢表雄酮中的应用

[发明专利]一种苯丙酮单加氧酶及在拉唑类药物制备中的应用-CN202110845214.9有效
发明人：林娟;许鑫琦;张娅娇;许炼;苏冰梅 -专利权人：福州大学
申请日： 2021-07-26 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明提供一种苯丙酮单加氧酶，其氨基酸序列由SEQ ID NO:2所示氨基酸序列通过突变获得，并公开基于该苯丙酮单加氧酶的不对称生物催化合成亚砜类药物的技术方法。本发明通过基因挖掘筛选获得来源于Limnobacter sp.的苯丙酮单加氧酶基因，采用基因工程技术构建重组大肠杆菌表达菌株，通过分子改造技术实现酶活力和立体选择性的提高。同时构建了单加氧酶突变体与不同脱氢酶的共表达菌株。以奥美拉唑硫醚为原料，采用全细胞或酶蛋白催化的方法，不对称催化合成光学纯埃索美拉唑。本发明可以在温和的条件下通过一步反应获得目标产物，没有副产物奥美拉唑砜，同时环境友好，是一种绿色生物催化合成途径。
一种丙酮单加氧酶类药物制备中的应用

[发明专利]一种高产洛伐他汀不产桔霉素红色红曲霉菌株的构建方法-CN202010113602.3有效
发明人： 许鑫琦;林娟;郭天龙;谢翠萍 -专利权人：福州大学
申请日： 2020-02-24 - 公布日： 2022-11-04 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明涉及一种高产洛伐他汀不产桔霉素红色红曲霉菌株的构建方法，包括以下步骤：（1）构建ctnR基因敲除质粒pGKO2‑Neo‑up‑ctnR‑dn；（2）构建ctnR基因敲除菌株GN‑01△ctnR；（3）敲除菌株GN‑01△ctnR的验证；（4）构建mokC基因过表达质粒；（5）在基因敲除菌株GN‑01△ctnR中导入mokC基因过表达质粒，获得mokC过表达菌株；（6）mokC过表达菌株的验证。本发明通过代谢产物验证，构建的GN‑01△ctnR基因缺失菌株已不产桔霉素，GN‑01△ctnR‑mokC过表达菌株产Monacolin K的能力较野生菌株提高了30%，达到267 mg/L。
一种高产洛伐他汀不产桔霉素红色曲霉菌株构建方法

[发明专利]一种定点突变改造热稳定性提高的琼胶酶突变体-CN201811408686.2有效
发明人：林娟;苏冰梅;许鑫琦;鄢仁祥 -专利权人：福州大学
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2021-11-30 - 主分类号： C12N9/38 文献下载
摘要：本发明提供一种定点突变改造热稳定性提高的琼胶酶突变体，属于基因工程与酶工程领域。本发明突变体是在SEQ ID NO.2所示的β‑琼胶酶rAgaZC‑1的氨基酸基础上，将第602位天冬氨酸突变为甘氨酸（D602G），突变体D602G核苷酸序列及对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。D602G的催化效率较于rAgaZC‑1有17.6%的提高。热失活动力学和水解动力学分析表明，D602G的热稳定性明显提高，T5010提高1.5℃，41℃下的半衰期t1/2延长3倍，且在43℃下可以积累更多的琼胶寡糖，提高了琼胶酶在降解琼脂糖制备琼胶寡糖上的应用潜力。
一种定点突变改造热稳定性提高琼胶酶突变体

[发明专利]一种羰基还原酶突变体及其在制备甾体激素--睾酮中的应用-CN202110831411.5在审
发明人：林娟;苏冰梅;赵鸿儒;许鑫琦;许炼 -专利权人：福州大学
申请日： 2021-07-22 - 公布日： 2021-10-22 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种羰基还原酶突变体及其在制备甾体激素‑‑睾酮中的应用。将羰基还原酶突变体PmCRm与甲酸脱氢酶BstFDH_m在大肠埃希氏菌中共表达，并以该共表达工程菌的静息细胞作为生物催化剂催化雄甾‑4‑烯‑3，17‑二酮合成睾酮。该生物催化剂具有较高的催化活性、区域选择性和立体选择性，可以在10 h以内完全转化28.8 g/L雄甾‑4‑烯‑3，17‑二酮生成目标产物睾酮，且无副产物产生，其底物投料量、转化率和时空转化率皆为国内生物法制备睾酮的最高水平，经过分离纯化，产物回收率高达95%以上，说明该生物催化剂是睾酮绿色合成的高效催化剂。
一种羰基还原酶突变体及其制备激素睾酮中的应用

[发明专利]“一菌多酶”全细胞不对称合成(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸的方法-CN201911340672.6有效
发明人：林娟;许炼;许鑫琦;王力超;赖凌燕;陈承滔 -专利权人：福州大学;福建昌生生物科技发展有限公司
申请日： 2019-12-23 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： C12P13/04 文献下载
摘要：本发明提供了“一菌多酶”全细胞不对称合成(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的方法，属于生物催化和酶工程领域。通过在大肠杆菌BL21（DE3）工程菌中同时表达L‑苏氨酸转醛酶（PsLTTA）、乙醇脱氢酶（ApADH）和甲酸脱氢酶（CbFDH），实现(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的不对称高效生物合成。本发明在常温常压下通过一步反应便可获得β‑氨基醇类抗生素的关键手性砌块(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸，同时解除了副产物乙醛对PsLTTA的抑制作用，为一种高效绿色生物合成途径。
一菌多酶细胞不对称合成甲砜基苯丝氨酸方法

[发明专利]一种定点突变改造的碱性普鲁兰酶及其应用-CN201810813706.8有效
发明人：林娟;林云;王国增;许鑫琦;黄晗 -专利权人：福州大学
申请日： 2018-07-23 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明提供一种定点突变改造的碱性普鲁兰酶及其应用，本发明定点突变改造的碱性普鲁兰酶是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸基础上，将第744位苯丙氨酸突变为丙氨酸。对突变体F744A转化大肠杆菌进行异源表达，发现突变体酶活提高了32.18%；热稳定性也得到了提高，T5030为55.84℃，比原始酶PulSL3△C提高了2.94℃；突变体F744A的pH稳定范围更宽，在pH 5.0~10.0范围内保温1 h仍可保留90%以上的酶活力。作为添加剂应用于洗涤剂行业，可以明显提高洗涤效果。
一种定点突变改造碱性普鲁兰酶及其应用

[发明专利]一种褐藻胶裂解酶突变体及其应用-CN201910425967.7有效
发明人：林娟;曾德样;许鑫琦 -专利权人：福州大学
申请日： 2019-05-21 - 公布日： 2020-12-25 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明涉及一种褐藻胶裂解酶突变体及应用，属于酶工程和基因工程领域，该突变体在序列SEQ ID NO.3基础上将第226位E突变为K，经过表达，突变体酶活提高1.11倍，粗酶液经过纯化后比活力较截短酶AlgL‑T157N提高1.03倍；突变体最适温度55℃，在pH 6.0‑8.0内保温1 h酶活力基本不变，具有较强pH稳定性；突变体对褐藻酸钠、Poly M和Poly G的催化效率Kcat/Km分别比AlgL‑T157N提高10.22、8.59、2.97倍。本发明采用结构序列分析和软件辅助筛选相结合的方法，确定突变位点，通过PCR定点突变得到催化活性提高的突变体，为其进一步的工业化应用奠定基础。
一种褐藻裂解突变体及其应用

[发明专利]一种L-苏氨酸转醛酶突变体的高通量快速筛选方法-CN201911342288.X在审
发明人：林娟;许炼;王力超;许鑫琦;陈承滔;赖凌燕 -专利权人：福州大学;福建昌生生物科技发展有限公司
申请日： 2019-12-23 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12Q1/48 文献下载
摘要：本发明公开了一种L‑苏氨酸转醛酶突变体的高通量快速筛选方法，属于生物化学和酶工程领域。本发明取乙醛及乙醇脱氢酶反应液，随即置于酶标仪中检测OD340nm随时间的变化情况，计算OD340nm下降的平均反应速率VOD340nm，以乙醛浓度为自变量x，VOD340nm为因变量y，得到回归方程y＝ax，以及乙醛标准曲线。转醛反应液、L‑苏氨酸转醛酶突变体全细胞反应液，充分混匀反应结束后，离心除去细胞沉淀，取上清液和乙醇脱氢酶反应液，随即置于酶标仪中检测OD340nm随时间的变化情况，计算OD340nm下降的平均速率VOD340nm；通过VOD340nm计算得到反应液中乙醛的浓度，以乙醛浓度的高低来筛选L‑苏氨酸转醛酶突变体。本发明不受反应液中的杂质干扰，灵敏度和准确性高，重复性好，操作简便，便于推广应用。
一种苏氨酸转醛酶突变体通量快速筛选方法

[发明专利]一种功能性κ-卡拉胶寡糖的酶解制备方法-CN201811408665.0在审
发明人：林娟;张娅娇;许鑫琦 -专利权人：福州大学
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-02-22 - 主分类号： C12N9/38 文献下载
摘要：本发明提供一种功能性κ‑卡拉胶寡糖的酶解制备方法，属于生物工程领域。以麒麟菜为原料采用高温水提法提取卡拉胶，利用发酵制备获得的κ‑卡拉胶裂解酶降解卡拉胶制备κ‑卡拉胶寡糖。本发明通过开发可生物降解卡拉胶多糖的κ‑卡拉胶裂解酶，再利用酶工程技术取代传统的化学降解法制备κ‑卡拉胶寡糖，使不易被人体吸收利用的高黏度多糖降解成富含生理活性的卡拉胶寡糖，以及一些小分子活性物质，实现红藻资源的高值化利用。
卡拉胶寡糖制备裂解酶酶解小分子活性物质生物工程领域高值化利用化学降解法可生物降解酶工程技术多糖降解人体吸收生理活性传统的高温水高黏度再利用麒麟菜富含红藻降解发酵开发

[发明专利]一种水产饲料添加剂褐藻寡糖的制备方法-CN201811137102.2在审
发明人：林娟;李玉芬;许鑫琦;曾德样 -专利权人：福州大学
申请日： 2018-09-28 - 公布日： 2019-01-18 - 主分类号： A23K50/80 文献下载
摘要：本发明提供一种水产饲料添加剂褐藻寡糖的制备方法，属于水产饲料领域。本发明采用碱提醇沉法从海带中提取褐藻胶，利用褐藻胶裂解酶水解褐藻胶制备褐藻寡糖，添加于水产饲料中，并应用于大黄鱼和石斑鱼的养殖。添加褐藻寡糖可极显著地提高大黄鱼和石斑鱼的体重、全长、存活率，大黄鱼和石斑鱼肌肉中的蛋白质含量、EAA/TAA和EAA/NEAA的比例，大黄鱼血清中过氧化氢酶和溶酶菌活力，石斑鱼血清中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、过氧化氢酶和溶菌酶的活力，大黄鱼和石斑鱼消化系统中的蛋白酶活性（P<0.01）。同时，酶解制备的褐藻寡糖具有抑制水产病原菌的效果。
大黄鱼褐藻寡糖石斑鱼制备水产饲料添加剂过氧化氢酶水产饲料褐藻胶血清消化系统褐藻胶裂解酶蛋白酶活性碱性磷酸酶水产病原菌存活率醇沉法磷酸酶溶菌酶中酸性水解海带碱提酶解溶酶蛋白质肌肉养殖应用

[发明专利]一种红曲洛伐他汀的纯化制备方法-CN201610130764.1有效
发明人：林娟;李亮;许鑫琦;叶秀云 -专利权人：福州大学
申请日： 2016-03-09 - 公布日： 2017-12-08 - 主分类号： C07D309/30 文献下载
摘要：本发明属于药物的提取纯化领域，具体涉及一种红曲洛伐他汀的纯化制备方法。先采用硅胶柱对红曲霉液态发酵液的上清液进行分离，依次选用乙酸乙酯、乙酸乙酯和甲醇按体积比21混合的溶剂、乙酸乙酯和甲醇按体积比31混合的溶剂进行梯度洗脱，得溶解液；然后再采用LH20柱对溶解液进行分离，依次选用超纯水、20%（v/v）甲醇溶液、50%（v/v）甲醇溶液进行梯度洗脱，得到纯化的洛伐他汀溶液。本发明避免使用毒性较大的溶剂，分离效率明显提高（纯度可达95%），解决了工艺复杂、成本高的问题，适于工业化生产。
一种红曲洛伐他汀纯化制备方法

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