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- [发明专利]一种DNA分子克隆方法及其应用-CN201710222909.5有效
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言普;周鹏;沈文涛;庹德财;黎小瑛
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中国热带农业科学院热带生物技术研究所
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2017-04-07
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2023-10-13
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C12N15/66
- 本发明公开了一种DNA分子克隆方法及其应用,所述方法包括以下步骤:获得入门载体含有ccdB基因,ccdB基因两端分别依次连接XcmI酶切位点、接头序列和SfiI酶切位点;获得表达载体含有ccdB基因,ccdB基因两端分别依次连接SfiI酶切位点和接头序列;通过PCR获得目标DNA,通过TA克隆插入到所述入门载体,获得入门克隆;或在PCR过程中通过引物加入相应的接头序列,获得线性PCR产物;将上述入门克隆或线性PCR产物与表达载体混合,在克隆反应液作用下完成克隆。本发明改进了克隆反应液以及入门载体和表达载体的结构,实现单个或多个线性PCR产物或环状质粒上的DNA在克隆反应液作用下直接克隆到环状目标载体的一个或多个部位,提高了克隆效率,可广泛用于各种类型的DNA分子克隆。
- 一种dna分子克隆方法及其应用
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