[发明专利]一种DNA分子克隆方法及其应用

摘要

本发明公开了一种DNA分子克隆方法及其应用，所述方法包括以下步骤：获得入门载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接XcmI酶切位点、接头序列和SfiI酶切位点；获得表达载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接SfiI酶切位点和接头序列；通过PCR获得目标DNA，通过TA克隆插入到所述入门载体，获得入门克隆；或在PCR过程中通过引物加入相应的接头序列，获得线性PCR产物；将上述入门克隆或线性PCR产物与表达载体混合，在克隆反应液作用下完成克隆。本发明改进了克隆反应液以及入门载体和表达载体的结构，实现单个或多个线性PCR产物或环状质粒上的DNA在克隆反应液作用下直接克隆到环状目标载体的一个或多个部位，提高了克隆效率，可广泛用于各种类型的DNA分子克隆。

主权项

一种DNA分子克隆方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、获得入门载体，所述入门载体含有ccdB基因，所述ccdB基因一端依次连接XcmI酶切位点、第一接头序列和SfiI酶切位点，另一端依次连接XcmI酶切位点、第二接头序列和SfiI酶切位点；S2、获得环状表达载体，所述表达载体含有ccdB基因，所述ccdB基因一端依次连接SfiI酶切位点和第三接头序列，另一端依次连接SfiI酶切位点和第四接头序列；所述第三接头序列与第一接头序列相同，所述第四接头序列与第二接头序列相同；S3、通过PCR获得目标DNA，通过TA克隆插入到所述入门载体，获得入门克隆；或者在PCR过程中通过引物加入相应的接头序列，获得线性PCR产物；S4、将上述入门克隆或线性PCR产物与表达载体混合，在克隆反应液作用下完成克隆。