本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种海洋低温苹果酸脱氢酶启动子和终止子,包括包含其元件的DNA表达盒。本发明通过扩增太平洋海洋杆菌R‑5321(Oceanobacillus picturae strain R‑5321)苹果酸脱氢酶基因组DNA上下游序列,进行生物学信息分析和功能验证,获得可广泛用于太平洋海洋杆菌属(Oceanobacillus picturae)中基因表达、遗传工程操作和菌株改良的启动子和终止子,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。有利于促进今后的太平洋海洋杆菌属细菌的菌株改良和代谢工程的研究。
本发明属于生物工程领域。涉及一种海洋低温苹果酸脱氢酶基因及其重组表达载体,其是从太平洋海洋杆菌R‑5321(Oceanobacillus picturae strain R‑5321)分离的编码低温苹果酸脱氢酶的核苷酸序列,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。利用无限制克隆法(RF克隆),成功构建了海洋低温MDH表达载体pET‑28a‑MDH。将表达载体电转入宿主细胞C43(DE3)中,并利用IPTG进行诱导表达海洋低温MDH蛋白。表达产物具有海洋低温苹果酸脱氢酶功能,能催化苹果酸转化成草酰乙酸。