[发明专利]一种筛选高产低温苹果酸脱氢酶细菌菌株的方法

摘要

本发明涉及发酵工程领域，具体是一种筛选高产低温苹果酸脱氢酶细菌菌株的方法。苹果酸脱氢酶是细胞中心氧化通路的关键酶，并且有相关报道其与细菌鞭毛运动有着密切关联，本发明通过溴甲酚绿，进行初筛，筛选出产酸性较强的菌株；利用MTT检测菌株的动力性，进行第二次筛选，选择动力性较强的菌株测酶活，通过双重筛选准确的筛选出高产MDHs的低温菌株，最后通过检测酶活，来最终确定高产菌株。本发明可在20天内方便、准确地筛选低温高产胞内苹果酸脱氢酶的细菌菌株，弥补了苹果酸脱氢酶筛选培养基相关领域的空白。

主权项

1.一种筛选高产低温苹果酸脱氢酶细菌菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)从深海海泥、海水中采集样本；(2)初筛：步骤(1)中采集的样本进行梯度稀释，涂布于含有溴甲酚绿的牛肉膏蛋白胨固体培养基，25℃，恒温培养3‑4天；(3)纯化：挑取步骤(2)中生长旺盛、黄绿色透明圈较大的菌落进行分离纯化，采用三局划线的方法接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基；25℃，恒温培养1‑2天，此步骤重复2‑4次；(4)复筛：将步骤(3)纯化的菌落用接种针沾取单个菌落，穿刺接种至MTT牛肉膏蛋白胨半固体培养基1/3深度；(5)筛选：选取沿穿刺线扩散到未穿刺的培养基部位呈弥漫蓝色云雾状的菌株，接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，25℃，恒温培养1‑2天；(6)将步骤(5)得到的菌株以5％接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，150rad，25℃，摇床培养1‑2天，菌体超声破碎，测酶活，筛选产酶活性高的菌株，得到高产低温苹果酸脱氢酶细菌菌株。