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[发明专利]一种基于CRISPR/Cas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法-CN202211095808.3在审
发明人：陈翊平;魏露雨;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2022-09-08 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12Q1/6825 文献下载
摘要：本发明涉及食品安全分析技术领域。本发明提供了一种基于CRISPR/Cas12a磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：提取待检样品的基因组DNA；制备MNP‑ploy‑ALP并利用靶标激活的Cas12a对其进行反式切割；磁分离，上清液中加入磷酸化抗坏血酸酯；加入Cu(II)、叠氮‑MNP偶联物和炔基‑MNP偶联物；磁分离，未结合的叠氮‑MNP偶联物作为信号探针，测定对应溶液的横向弛豫时间计算待测样品中的目标物含量。本发明无需进行核酸预扩增即可实现MRSA的高灵敏检测，避免了传统靶标核酸扩增所带来的交叉污染风险，为食品安全中MRSA的检测提供了高灵敏、准确、快速的方法。
一种基于 crispr cas12a 磁弛豫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法

[发明专利]一种酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法-CN201910892437.3有效
发明人：陈翊平;张峰;王知龙;许秀丽 -专利权人：华中农业大学;中国检验检疫科学研究院
申请日： 2019-09-20 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12Q1/6816 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，主要内容是将Mn(VII)/Mn(II)作为信号读出系统，结合DNA杂交技术，构建以DNA杂交为基础的磁传感器，该方法首先根据致病菌的基因序列设计并合成与该基因互补的正向探针和反向探针，将正向探针偶联在纳米磁颗粒表面，用于特异性地富集待测致病菌DNA片段，然后加入生物素标记的反向探针，形成DNA互补链，再加入链霉亲和素标记的碱性磷酸酶(ALP)，形成“磁纳米颗粒‑DNA杂交双链‑ALP”的夹心结构，该夹心结构的含量与待测致病菌中的DNA含量成正相关。该方法不需要DNA扩增，提高了DNA分子检测的效率，拓宽了基于超顺纳米磁颗粒的低场核磁共振传感器的应用范围，进而为食源性致病菌的检测提供一种有力的工具。
一种酶促低场核磁共振 dna 传感器检测食源性致病菌方法

[发明专利]一种基于乳胶微球浓度变化的多目标物同时检测方法-CN202110898312.9有效
发明人：陈翊平;周翠云;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-08-05 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： G01N21/33 文献下载
摘要：本发明属于生化分析技术领域。具体涉及一种基于乳胶微球浓度变化的多目标物同时检测方法。以纳米磁颗粒为磁分离载体，其表面偶联不同目标物的捕获抗体；以不同粒径的乳胶微球为信号探针，其表面偶联不同目标物的检测抗体或完全抗原，每一种粒径对应一种目标物；磁分离载体、信号探针与待测目标物进行免疫反应；磁分离后收集分离液中未参与反应的信号探针溶液；同时测定不同粒径信号探针的紫外吸收峰所对应的最大吸光度，依据吸光度的变化计算出对应的目标物含量。本发明可多目标物同时检测，大大缩短了检测时间，且紫外分光光度计操作简便，灵敏度高、稳定性好、成本低。
一种基于乳胶浓度变化多目标同时检测方法

[发明专利]一种基于超灵敏磁弛豫时间传感器的免疫分析方法-CN202110495775.0有效
发明人：陈翊平;赵俊朋;王知龙;黄伟 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2022-08-16 - 主分类号： G01N33/577 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于超灵敏磁弛豫时间免疫传感器的免疫分析方法，该方法以氨基化纳米磁颗粒作为磁信号探针，以聚多巴胺作为信号放大系统，与特异性免疫反应相结合，并基于辣根过氧化物酶催化盐酸多巴胺聚合形成聚多巴胺，成功实现了对检测对象的超灵敏检测，解决了传统磁弛豫时间传感器检测痕量小分子物质灵敏度低的难题，可用于食品中痕量危害因子(真菌毒素、抗生素等)、生物标志物等的快速、超灵敏检测。
一种基于灵敏弛豫时间传感器免疫分析方法

[发明专利]一种基于电阻微米孔颗粒计数器的检测方法及其应用-CN202010253865.4有效
发明人：陈翊平;王知龙 -专利权人：武汉生之源生物科技股份有限公司
申请日： 2020-04-02 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： G01N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于电阻微米孔颗粒计数器的检测方法及其应用，涉及食品安全、临床诊断和环境监测领域，该方法包括以下步骤：根据待测物的种类N，N大于等于1，选取N份粒径不同的绝缘微球并与待测物一一对应；根据待测物，在相应的绝缘微球表面修饰特异性识别分子，与待测物作用后磁分离，使用颗粒计数器对未反应的绝缘微球数量进行测定；待测物包括生物标志物、药物残留物、抗生素和/或细菌。本发明通过免疫反应、DNA分子杂交等方法建立待测物与微球个数之间的定量关系，再通过电阻微米孔颗粒计数器对绝缘微球的个数进行测定，间接得到待测物的浓度，本发明不仅能够实现多指标同时检测，且成本较低，稳定性好，准确度较高。
一种基于电阻微米颗粒计数器检测方法及其应用

[发明专利]一种基于磁分离同时检测多种目标物的生化分析方法-CN202110158962.X有效
发明人：陈翊平;周阳;王知龙;赵维琦;鲁鹏 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-02-05 - 公布日： 2022-06-28 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于磁分离同时检测多种目标物的生化分析方法，该方法将生化反应与可视化微球计数、机器视觉与深度学习相结合，以高分子微球作为信号探针，将与待测目标物对应的生物识别分子分别偶联在纳米磁颗粒和信号探针表面，进行免疫反应或者DNA分子杂交反应，磁分离后直接对反应复合物中的信号探针进行光学显微成像计数，并使用不同粒径或颜色的信号探针用于区分不同的检测对象，最终实现了多种目标物的同时检测。
一种基于分离同时检测多种目标生化分析方法

[发明专利]一种基于差分阻抗颗粒计数的免疫分析方法-CN202011422402.2有效
发明人：陈翊平;周阳;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2020-12-08 - 公布日： 2022-04-26 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于差分阻抗颗粒计数的免疫分析方法，包括以下步骤：1)以高分子绝缘微球为信号探针，将生物识别分子与绝缘微球偶联，然后将待测目标物与生物识别分子进行免疫反应，使绝缘微球的粒径和数量发生变化；2)将反应液注入颗粒计数通道，同时向通道内高速注入缓冲液，基于流体力学原理形成层流，使反应液中的绝缘微球稳定有序地通过计数通道；3)在颗粒计数通道的两端设置正、负电极，收集电势信号，经放大、滤波处理后对绝缘微球的粒径和数量进行分析，进而得到待测目标物的含量。本发明具有检测成本低、操作便利，不会造成通道堵塞，无需反复清洗排堵等优点，极大地提高了检测效率，而且还具有较好的准确性和抗干扰能力。
一种基于阻抗颗粒计数免疫分析方法

[发明专利]一种基于颗粒计数的均相反应体系、方法及应用-CN202011076429.0在审
发明人：陈翊平;王知龙;董永贞 -专利权人：武汉生之源生物科技股份有限公司
申请日： 2020-10-10 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于颗粒计数的均相反应体系、方法及应用，涉及食品安全、体外诊断和环境监测领域，该体系包括绝缘微球，绝缘微球的表面偶联有生物配体，生物配体为与目标物相对应的抗体、完全抗原、核酸适配体或DNA探针；提供目标物与微球‑生物配体反应的载体；用于测定颗粒物粒径和数量的颗粒计数器；微球‑生物配体与目标物反应后，反应体系中存在未反应的微球‑生物配体、微球‑生物配体‑目标物或/和粒径＞微球‑生物配体的复合物，其中，微球‑生物配体、微球‑生物配体‑目标物和微球的粒径相当，使用颗粒计数器对反应后粒径与微球粒径相当的物质数量进行测定，确定目标物浓度。本发明的检测成本较低，速度较快。
一种基于颗粒计数均相反应体系方法应用

[发明专利]基于点击反应信号放大可视化检测多目标物的均相分析方法及其配套设备-CN202111313977.5在审
发明人：陈翊平;周阳;赵维琦;赵永坤;王知龙;冯牛 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-11-08 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12Q1/6834 文献下载
摘要：一种基于点击反应信号放大可视化检测多目标物的均相分析方法及其配套设备。所述方法的包括均相反应部分、可视化成像部分、机器视觉识别部分，其中均相反应部分根据待测物对灵敏度的不同要求，选择不同的放大方案，将点击反应多步信号放大免疫反应，配套仪器设备，微流控芯片和机器视觉软件四大部分有机结合，引入了微流控芯片，缩小了反应体系，这个点击反应的形式+微流控芯片与之前的离心管内反应相比，提高了方法的灵敏度及准确性。
基于点击反应信号放大可视化检测多目标均相分析方法及其配套设备

[发明专利]酶促低场核磁共振免疫传感器检测食源性致病菌的方法-CN201910893003.5有效
发明人：陈翊平;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-09-20 - 公布日： 2022-03-22 - 主分类号： G01N24/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶促低场核磁共振免疫传感器检测食源性致病菌的方法，主要内容是将Mn(VII)/Mn(II)作为信号读出系统，结合免疫分析技术，构建了基于抗体‑抗原识别的磁免疫传感器，在该方法中，将碱性磷酸酶(ALP)作为免疫标记酶应用到该传感器中，将抗坏血酸磷酸酯作为ALP的底物，ALP可以将抗坏血酸磷酸酯去磷酸化，进而转化为具有还原性的抗坏血酸，而抗坏血酸可以将Mn(VII)转变为Mn(II)，进而引起磁信号(横向弛豫时间，T2)从无到有的改变，T2的改变量和待测样品中食源性致病菌呈正相关。本发明拓宽了基于超顺纳米磁颗粒磁弛豫时间传感器检测范围的限制，极大地提高了分析性能，进而为食品安全的前期防控提供一种有力的工具。
酶促低场核磁共振免疫传感器检测食源性致病菌方法

[发明专利]一种基于绝缘微球浓度变化导致微通道电阻改变的生物传感检测方法-CN202011239645.2有效
发明人：陈翊平;何慧禹;聂荣彬;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2020-11-09 - 公布日： 2021-12-14 - 主分类号： G01N27/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于绝缘微球浓度变化导致微通道电阻改变的生物传感检测方法，将生物识别分子分别修饰在磁珠和绝缘微球的表面，然后加入待测目标物进行生物反应，磁分离后，在微通道两端施以恒定的电压或电流，反应液中的绝缘微球在电渗流的作用下通过微通道并产生明显的阻塞效应，从而导致微通道电阻的改变，进而使电流或电压发生改变，而电流或电压的改变量又与绝缘微球的浓度相关，据此原理可检测绝缘微球浓度并间接得到待测目标物含量。本发明实现了对一系列目标物的检测，展现出良好的分析性能，而且设备成本低、简单高效，在体外诊断、食品安全、环境监测等领域具有很好的应用前景。
一种基于绝缘浓度变化导致通道电阻改变生物传感检测方法

[发明专利]一种基于绝缘微球状态变化导致微通道电阻改变的均相分析方法-CN202011239627.4有效
发明人：陈翊平;何慧禹;聂荣彬;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2020-11-09 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： G01N27/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于绝缘微球状态变化导致微通道电阻改变的均相分析方法，将生物识别分子分别修饰在绝缘微球的表面，然后加入待测目标物进行生物反应，在微通道两端施加恒定的电压或电流，形成闭环电路，混合液在电渗流驱动下流经微通道，绝缘微球在通过微通道时导致闭环电路的电阻上升，并且上升幅度与绝缘微球的聚集状态相关，通过检测闭环电路的电流或电压的变化值从而可间接得到待测目标物含量。本发明无需任何洗涤、分离步骤，仅涉及一步生化反应，从而在保证准确度的前提下，极大地缩短了分析时间，具有准确、快速、成本低等优点，在食品安全、体外诊断、环境监测等需要现场快速检测的领域具有良好的应用前景。
一种基于绝缘球状变化导致通道电阻改变均相分析方法

[发明专利]基于生物正交反应的横向弛豫时间免疫传感器的制备方法、传感器及其应用-CN201910509892.0有效
发明人：陈翊平;董永贞;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-06-13 - 公布日： 2021-09-14 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于生物正交反应的横向弛豫时间免疫传感器的制备方法、传感器及其应用，涉及食品安全和体外诊断分析领域，该方法包括：在纳米微球表面偶联纳米磁颗粒，得到纳米微球‑磁颗粒，将纳米微球‑磁颗粒与抗体偶联，得到纳米微球‑磁颗粒‑抗体；在磁珠表面修饰完全抗原或捕获抗体，磁珠的粒径大于纳米磁颗粒。该免疫传感器包括纳米微球‑磁颗粒‑检测抗体，当待测目标物的相对分子量≤5000时，磁珠偶联完全抗原；当待测目标物的相对分子量＞5000时，磁珠偶联捕获抗体。本发明传感器基于生物正交反应，在不同粒径的纳米微球表面偶联数量不同的纳米磁颗粒，制备磁信号不同的磁探针，具有线性范围可调的特点，且灵敏度较高。
基于生物正交反应横向弛豫时间免疫传感器制备方法及其应用

[实用新型]一种用于免疫分析的微流控芯片-CN202022919806.4有效
发明人：陈翊平;周阳;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2020-12-08 - 公布日： 2021-08-31 - 主分类号： B01L3/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于免疫分析的微流控芯片，包括芯片本体，所述芯片本体内设有微通道，所述微通道由呈Y形分布的反应通道、颗粒计数通道、缓冲液通道三部分组成，所述颗粒计数通道上设有差分阻抗颗粒计数装置，所述差分阻抗颗粒计数装置设有三个金电极，所述金电极的一端设在颗粒计数通道的内部，另一端位于芯片本体的外部且与信号发生器、信号放大器、锁相放大器、滤波器和示波器连接。本实用新型可在芯片内进行免疫反应并对反应产物进行颗粒计数，从而得出待测目标物的含量，具有结构简单、操作简便、检测效率高等优点。
一种用于免疫分析微流控芯片

[发明专利]一种纳米螯合筛介导的低场核磁共振免疫传感器及其应用-CN201910690169.7有效
发明人：陈翊平;董永贞;王知龙 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-07-29 - 公布日： 2021-07-13 - 主分类号： G01N24/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种纳米螯合筛介导的低场核磁共振免疫传感器及其应用，属于食品安全分析和检测领域。该免疫传感器包括完全抗原或捕获抗体‑聚苯乙烯微球‑多聚谷氨酸、磁珠‑抗体、聚苯乙烯微球‑叠氮、磁颗粒‑炔。本发明传感器基于螯合化学反应，制成纳米螯合筛，特异性吸附铜离子，进而控制铜离子催化点击化学反应的程度，实现低场核磁共振免疫传感器的信号读出和放大，具有灵敏度高、特异性强等特点，可以实现对多种小分子目标物包括农药、抗生素以及生物大分子的检测。
一种纳米螯合筛介导核磁共振免疫传感器及其应用

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