本发明属于基因工程技术领域,涉及一种靶向调控黑松富含亮氨酸重复序列型类受体蛋白激酶基因的miRNA序列与应用,该miRNA序列,通过小RNA测序分析法从黑松幼苗中得到,miRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,并通过聚合酶链式反应快速扩增cDNA法克隆得到其扩增序列,该miRNA负向调控富含亮氨酸重复序列型类受体蛋白激酶基因unigene0041830,与黑松抗病性相关;通过对该miRNA序列的克隆与功能分析,为研究黑松抗松材线虫病相关miRNA及靶基因的互调关系奠定了基础,对于松材线虫病防治以及检测判断黑松植株是否感染松材线虫病具有重要的意义。