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[发明专利]一种2’-脱氧-5-氟尿苷的微生物合成方法-CN201410504731.X在审
发明人：易喻;应国清;江林林;王鸿;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2014-09-27 - 公布日： 2015-01-21 - 主分类号： C12P19/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种2’-脱氧-5-氟尿苷的微生物合成方法，所述的方法为：以2’-脱氧核糖-1-磷酸二环己胺盐和5-氟尿嘧啶为底物，以产嘧啶核苷磷酸化酶的菌株经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以pH值为6.5～8.5的磷酸缓冲液为反应介质，在45～65℃条件下进行转化反应，反应结束后，获得2’-脱氧-5-氟尿苷；本发明方法2’-脱氧-5-氟尿苷的转化率达到了79.36％，一步酶促合成，条件温和，反应时间短，并且避免了底物脱氧核糖供体来源不足、价格昂贵的问题；应用全细胞进行催化，无需进行酶的分离纯化，反应结束后菌体回收方便，有利于工业规模化生产。
一种脱氧氟尿苷微生物合成方法

[发明专利]产水解酶的黑曲霉及其在制备香菇酶解物中的应用-CN201310601704.X有效
发明人：梅建凤;陈虹;金航;应国清;王鸿;易喻;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2013-11-22 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一株产水解酶的黑曲霉（Aspergullus niger）MJ及其在制备香菇酶解物中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏编号：CCTCC NO：M2013329，保藏日期：2013年7月11日。本发明的有益效果主要体现在：（1）黑曲霉是食品工业中常用菌种，不产有害物质，使用安全；（2）水解酶的发酵工艺简单，酶的生产成本低；（3）黑曲霉MJ发酵制备的复合水解酶，对香菇中的蛋白质、核酸和多糖的水解效率高；（4）生产工艺不使用有毒有害原料，环保无污染；（5）产品天然绿色，味道鲜美，营养丰富，保健价值高，应用领域广。
水解曲霉及其制备香菇酶解物中的应用

[发明专利]产糖苷酶的链霉菌及其在生物转化制备葫芦素B中的应用-CN201310597855.2有效
发明人：梅建凤;李莎;金航;应国清;王鸿;易喻;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2013-11-22 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一株糖苷酶产生菌——链霉菌（Streptomyces sp.）RW-2，及其在生物转化葫芦素B-2-O-葡萄糖苷制备葫芦素B中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏编号：CCTCC No：M2013330，保藏日期2013年7月17日。本发明的有益效果主要体现在：（1）链霉菌是发酵工业中常用菌种，无毒无害，使用安全；（2）链霉菌RW-2营养要求简单、生长迅速、容易培养；（3）链霉菌RW-2产生的糖苷酶为胞外酶，分离除去菌体，粗酶液或经稀释后，即可作为生物转化体系，（4）从甜瓜蒂提取的总葫芦素经生物转化处理后，其中的葫芦素B-2-O-葡萄糖苷几乎能全部转化为葫芦素B，葫芦素B的含量可提高1～2.7倍。
糖苷酶霉菌及其生物转化制备葫芦中的应用

[发明专利]琼胶寡糖在制备唾液淀粉酶激活剂中的应用-CN201310224435.X有效
发明人：梅建凤;应国清;郑兰娟;王鸿;易喻;陈建澍;张彦璐 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2013-06-05 - 公布日： 2013-10-02 - 主分类号： C12N9/96 文献下载
摘要：本发明提供了琼胶寡糖在制备唾液淀粉酶激活剂中的应用。所述的琼胶寡糖为聚合度2～10的新琼寡糖（主要组成是新琼四糖和新琼六糖）。本发明的有益效果主要体现在：（1）本发明的琼胶寡糖的制备方法简单，制备的琼胶寡糖，经过除盐，无需纯化为单一聚合度寡糖；（2）本发明中的琼胶寡糖对唾液淀粉酶的促进效率高，在优选条件下，可将酶活提高1.2倍；（3）本发明中的琼胶寡糖可提高唾液淀粉酶的高温耐受性，使其在35～55℃保温2h酶活降低幅度小于57%；（4）本发明中的琼胶寡糖可提高唾液淀粉酶的pH稳定性，使其在pH6～8范围内酶活降低幅度小于6%；（5）本发明中的琼胶寡糖可与唾液淀粉酶的激活剂-氯离子协同增强唾液淀粉酶的酶活，在优选条件下，可将酶活提高1.9倍。
寡糖制备唾液淀粉酶激活剂中的应用

[发明专利]温敏性固定化木瓜蛋白酶及其在制备单克隆抗体中的应用-CN201310221532.3无效
发明人：应国清;易喻;黄婷婷;梅建凤;王鸿;陈建澍;张彦璐 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2013-06-05 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12N11/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种温敏性的固定化木瓜蛋白酶，及其在制备单克隆抗体中的应用。本发明采用温敏性材料聚（N-异丙基丙烯酰胺）为制备载体固定化木瓜蛋白酶，该材料具有的特性是：在常温下溶于水形成均相，当温度超过其最低临界溶解温度时便固相析出，以此为载体制备的固定化酶具有了热应答性质，将传统固定化可重复利用等优点及可溶性酶较少扩散限制等优点结合在一起。本发明提供了一种操作简单、对温度敏感的溶解-沉淀的固定化酶的制备方法，并将此固定化酶用于制备单克隆抗体片段。
温敏性固定木瓜蛋白酶及其制备单克隆抗体中的应用

[发明专利]一株海洋真菌桔青霉及其在制备抗肿瘤药物中的应用-CN201210572388.3有效
发明人：王鸿;潘超;赵美蓉;梅建凤;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2012-12-25 - 公布日： 2013-05-29 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——桔青霉（Penicillium citrinum） MNP12010101及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC No：M2012318，保藏日期2012年8月28日。本发明的有益效果主要体现在：（1）本发明具有抗肿瘤活性的桔青霉MNP12010101营养要求简单、容易培养；（2）该菌株的代谢产物具有抗肿瘤活性；（3）该菌株的次级代谢产物的抗肿瘤活性高，其培养所得的发酵液总浸膏对神经癌细胞（PC12），肝癌细胞（HepG2）和组织细胞淋巴瘤细胞（U937）均有一定的抗肿瘤活性。
海洋真菌青霉及其制备肿瘤药物中的应用

[发明专利]一株海洋真菌萨氏曲霉及其在制备抗肿瘤药物中的应用-CN201210574332.1有效
发明人：王鸿;叶建军;赵美蓉;梅建凤;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2012-12-25 - 公布日： 2013-05-01 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——萨氏曲霉（Aspergillus sydowii）MNP12010103及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC NO：M 2012391，保藏日期2012年10月8日。本发明的有益效果主要体现在：（1）本发明的海洋真菌萨氏曲霉MNP12010103营养要求简单、容易培养；（2）该菌株的代谢产物具有抗肿瘤活性；（3）该菌株的次级代谢产物的抗肿瘤活性高，其培养所得的发酵液总浸膏对HepG2细胞、PC12细胞和U937细胞有较强的抗肿瘤活性。
海洋真菌曲霉及其制备肿瘤药物中的应用

[发明专利]一株海洋真菌产黄青霉及其在制备抗肿瘤药物中的应用-CN201210574083.6有效
发明人：王鸿;杨雪萍;赵美蓉;易喻;梅建凤;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2012-12-25 - 公布日： 2013-05-01 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——产黄青霉（Penicillium chrysogenum）MNP07010101及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC No：M 2012317，保藏日期2012年8月28日。本发明的有益效果主要体现在：（1）本发明的海洋真菌菌株营养要求简单、容易培养；（2）该菌株的代谢产物具有抗肿瘤活性；（3）该菌株的次级代谢产物的抗肿瘤活性高，其培养所得的发酵液总浸膏对HepG2、PC12细胞和U937细胞有一定的抗肿瘤活性，对其总浸膏进行过HP-20大孔树脂柱处理，收集得到的小极性段落对HepG2、PC12、U937细胞抑制活性在浓度200μg/ml时抑制率最高可达90%以上，具有很强的抗肿瘤活性。
海洋真菌青霉及其制备肿瘤药物中的应用

[发明专利]一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法-CN201210083493.0有效
发明人：应国清;钱捷;彭美红;王鸿;蒲通;易喻;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2012-03-27 - 公布日： 2012-12-19 - 主分类号： C12P19/38 文献下载
摘要：本发明提供了一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法，该方法采用“结晶诱导不对称转化”技术合成得到了单一α构型的核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸，再利用这个中间体为底物，加入尿嘧啶，在尿苷磷酸化酶的作用下生物转化合成得到2′-脱氧尿苷。本发明化学-生物组合技术的应用，结合了化学法与生物法的优点，避免了各自的缺陷，收率高，适用于工业化生产，其中采用“结晶诱导不对称转化技术”可以得到供应充足，构型单一的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸中间体，无需再进行分离纯化；生物转化过程采用高效、专一的尿苷磷酸化酶催化一步完成，其专一性强，转化率高，条件温和，环境友好。
一种化学生物酶组合制备脱氧方法

[发明专利]产琼脂酶的类芽孢杆菌及其应用-CN201110433937.4有效
发明人：应国清;唐中秀;梅建凤;王鸿;易喻;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-12-22 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一株经离子注入诱变得到的琼胶酶高产菌株——类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)WL-15，及其在微生物发酵制备琼胶酶中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC No：M2011357，保藏日期2011年10月19日。本发明的有益效果主要体现在：(1)采用低能N+离子注入的方法进行诱变产琼胶酶微生物，具有突变率高、操作简单等优点；(2)诱变选育得到的菌株产琼胶酶遗传稳定性良好，高产特性不易发生退化；(3)菌株具有产酶活力高、营养要求低和发酵周期短等优点，可应用于工业发酵制备琼胶酶，而琼胶酶在制备琼胶寡糖等领域有多种用途。
琼脂芽孢杆菌及其应用

[发明专利]磺胺二甲基嘧啶亲和膜及其在抗体分离纯化中的应用-CN201110449444.X有效
发明人：应国清;朱丽;易喻;梅建凤;王鸿;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-12-29 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： B01D71/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种磺胺二甲基嘧啶亲和膜，所述的磺胺二甲基嘧啶的制备方法包括如下步骤：(1)取醋酸纤维素膜，先在碱性条件下充分水解，然后加入环氧氯丙烷进行环氧活化，反应结束后在抽滤条件下用去离子水洗至中性，得到环氧活化后的膜；(2)将磺胺二甲基嘧啶溶解于pH 10～12的碱性缓冲溶液中，然后将步骤(1)获得的环氧活化后的膜分散在上述溶液中，在50～65℃反应24h～36h，在抽滤条件下用去离子水洗至滤出液在280nm处的紫外吸收接近于0，干燥后即得磺胺二甲基嘧啶亲和膜。所述的磺胺二甲基嘧啶亲和膜对于抗体具有较好的吸附性能，尤其适于分离纯化免疫球蛋白IgG。
磺胺甲基嘧啶亲和及其抗体分离纯化中的应用

[发明专利]一种氯霉素单克隆抗体的制备方法-CN201010561726.4无效
发明人：应国清;汪竹环;易喻;陈建澍;梅建凤;王鸿 -专利权人：浙江工业大学;杭州博林生物技术有限公司
申请日： 2010-11-26 - 公布日： 2012-05-30 - 主分类号： C07K16/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种氯霉素（CAP）单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：(1)用重氮化方法制备CAP-BSA的抗原；(2)用CAP-BSA抗原淋巴免疫小鼠，第一次免疫与弗氏完全佐剂充分乳化，第二次和第三次免疫与弗氏不完全佐剂充分乳化，每次间隔7天，融合前三天腹腔直接注射抗原加强免疫；(3)用酶联免疫吸附法测小鼠血清效价；(4)选择血清效价最高的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合；(5)选择性培养基培养筛选融合细胞，检测筛选阳性细胞，克隆化培养，进一步克隆筛选阳性细胞，阳性克隆扩培与冻存；(6)将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以生产大量腹水；(7)用层析柱纯化腹水中的抗氯霉素单克隆抗体。制备得到的抗CAP-BSA单克隆抗体灵敏性高、特异性强、实用性好。
一种氯霉素单克隆抗体制备方法

[发明专利]一种磁性阴离子交换剂及其作为内毒素吸附介质的应用-CN201110238149.X有效
发明人：应国清;来灿林;易喻;梅建凤;王鸿;陈建澍;姜玉奇 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-08-18 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： B01J41/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种磁性阴离子交换剂及其作为内毒素吸附介质的应用，所述的磁性阴离子交换剂的制备方法包括如下步骤：(1)先将磁性材料分散在含有壳聚糖的乙酸溶液中，再将所得的水相I转移至含有司盘80的液体石蜡中，以甲醛和环氧氯丙烷为交联剂，采用反相悬浮法制得磁性壳聚糖微球；(2)将步骤(1)所得磁性壳聚糖微球先后用HCl和NaOH溶液浸泡，抽滤后用乙醇洗涤、干燥即得交联磁性壳聚糖微球，即磁性阴离子交换剂。该磁性阴离子交换剂不仅对于内毒素具有较高的去除率，并且对蛋白质的保留率也较高，磁性材料的引入也使其操作起来更为方便，也适于大量生物制品中内毒素的去除。
一种磁性阴离子交换及其作为内毒素吸附介质应用

[发明专利]一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法-CN201110403007.4无效
发明人：应国清;李慧娟;王鸿;易喻;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-12-07 - 公布日： 2012-04-18 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法：将活化的固定化木瓜蛋白酶于pH5.00.1mol/L醋酸缓冲液中，加入抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体，30～60℃水浴反应4～24h，反应液抽滤，滤饼B为固定化木瓜蛋白酶回收利用，滤液B即为含单克隆抗体片段的水解液，采用弱阴离子交换层析对含单克隆抗体片段的水解液进行分离纯化，获得所述抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段；本发明方法操作简便、纯化步骤少、所得抗体片段纯度高；本发明中制备的抗体片段只需经过一步纯化就可达到90％以上的纯度。
一种绒毛促性腺激素单克隆抗体片段制备方法

[发明专利]一种基于磁性壳聚糖微球的内毒素吸附介质及其使用方法-CN201110182649.6无效
发明人：应国清;来灿林;易喻;梅建凤;王鸿;陈建澍;姜玉奇 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-06-30 - 公布日： 2012-02-15 - 主分类号： B01J20/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于磁性壳聚糖微球的内毒素吸附介质及其使用方法，所述的内毒素吸附介质的制备方法包括如下步骤：(1)先将磁性材料分散在乙酸溶液中，加入壳聚糖配成水相I，再将该水相I转移至含有司盘80的液体石蜡中，以戊二醛为交联剂，采用反相悬浮法制得磁性壳聚糖微球；(2)将磁性壳聚糖微球分散到二甲基亚砜与氢氧化钠的混合溶液中，再加入环氧氯丙烷活化，去离子水洗涤至中性，得到活化后产物；(3)将活化后产物置于内毒素亲和配基溶液中固载，即得到所述的基于磁性壳聚糖微球的内毒素吸附介质。本发明的内毒素吸附介质不但对于内毒素具有较高的选择性，而且操作简便，可用于大量生物制品中内毒素的去除。
一种基于磁性聚糖内毒素吸附介质及其使用方法