本发明提供了应用多重探针熔解曲线法检测脑炎病毒核酸试剂盒及方法，包括荧光PCR反应液、酶混合液、阳性对照品、阴性对照品，所述荧光PCR反应液中含有PCR缓冲液、Mgcl2、dNTPs、六种脑炎病毒对应的上游引物、六种脑炎病毒对应的下游引物、六种脑炎病毒对应的荧光探针，所述六种脑炎病毒分别为肠道病毒、单纯疱疹病毒I型、单纯疱疹病毒II型、人巨细胞病毒、EB病毒、水痘带状疱疹病毒；所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16所示；所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17所示；所述荧光探针的序列如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18所示。
