本发明属于分子生物学技术领域,具体公开一种特异性识别重组猴痘病毒A35R蛋白的纳米抗体。本发明提供的纳米抗体包含至少三组互补决定区;所述互补决定区包括SEQ ID NO:1所示的CDR1,SEQ ID NO:2所示的CDR2和SEQ ID NO:3所示的CDR3。本发明的纳米抗体具有独特的CDR1、CDR2和CDR3区序列,使所述纳米抗体对重组猴痘病毒A35R蛋白具有特异的识别和结合能力,而与其他非特异性交叉反应性蛋白没有反应;本发明提供的纳米抗体还具有高耐性、高稳定性和高亲和性的特点,对猴痘病毒具有高度特异的识别和结合能力,具有制备猴痘病毒的预防、治疗或检测试剂的应用前景。