本发明公开了一种硫酸软骨素AC外切酶的重组大肠杆菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述硫酸软骨素AC外切酶的重组大肠杆菌，是将硫酸软骨素AC外切酶ChSase AC II与pET‑12a(+)质粒连接，同时与表达分子伴侣GroES‑GroEL的表达质粒pGro7共同转入大肠杆菌宿主BL21(DE3)，使ChSase AC II与分子伴侣共表达。本发明通过分子伴侣GroES‑GroEL提升了硫酸软骨素AC外切酶在大肠杆菌中的可溶性表达水平，使胞内外酶活力分别提升至10.52U/mL和7.63U/mL。本发明所述的硫酸软骨素AC外切酶能够将硫酸软骨素降解为二糖，具有实际应用价值。
本发明公开了一种透明质酸裂解酶重组菌及应用，属于基因工程和酶工程技术领域。所述重组菌包括来源于节杆菌Arthrobacter sp.CS01的透明质酸裂解酶HylA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，连接在其N端的甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶(GAPDH)基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，表达载体pET‑12a(+)，宿主菌株大肠杆菌BL21(DE3)。本发明获得的重组酶GAPDH‑HylA与HylA相比，比活力由19.8U/mg增加至25.7U/mg；Km由0.483mg/mL变为0.380mg/mL；最适反应pH由6变为7；最适反应温度由35℃变为45℃；增强了对底物的亲和度及热稳定性，改造后的酶更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率，且未改变其作用方式。
