本发明公开了一组糖基转移酶编码基因及其应用。本发明提供的糖基转移酶UGT94M2、UGT94BE1及其衍生多肽在五环三萜类化合物底物C‑28位第一个糖基上进行催化从而延伸糖链，并生成积雪草酸双糖苷、羟基积雪草酸双糖苷、积雪草苷和羟基积雪草苷的催化反应。核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；同时公开了所述的糖基转移酶基因编码的氨基酸序列，分别如序列SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。本发明还公开了含有上述基因的表达载体，以及由所述表达载体转化的宿主细胞。本发明基于基因组和转录组的相关数据筛选并鉴定关键糖基转移酶UGT94M2和UGT94BE1，完全解析了积雪草苷/羟基积雪草苷的生物合成途径，为采用合成生物学方法生产积雪草苷/羟基积雪草苷奠定了理论基础。
本发明公开了一种N‑糖基转移酶突变体AaFQ，是对来源于嗜沫凝聚杆菌中的N‑糖基转移酶基因经过S274A、Q468A、P496R三点突变获得，其基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了该突变体作为多肽糖基化修饰的工具酶在利用UDP‑Glc或UDP‑Gal或UDP‑Xyl将含有N‑X‑S/T序列的多肽进行糖基化形成糖肽或糖蛋白中的应用。实验证实本发明的突变体AaFQ相较野生型NGT糖基化效率显著提高，利用UDP‑Glc、UDP‑Gal和UDP‑Xyl的能力显著增强，能够实现简单快速的利用UDP‑Glc/UDP‑Gal/UDP‑Xyl将含有N‑X‑S/T序列的多肽进行糖基化修饰，并可进一步利用其他的糖基转移酶对糖肽的糖链进行修饰获得目的糖肽。这为多肽与蛋白的糖基化修饰提供了一种新途径，为糖蛋白疫苗的合成提供了一种简便方法。
本发明涉及一种转氨酶突变体在合成沙库必曲缬沙坦钠盐（LCZ696）关键手性中间体D‑4,4’‑联苯丙氨酸中的应用，属于生物催化合成技术领域。本发明所述的突变体是SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的四联突变体，转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，对应的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。相比于野生型转氨酶母本，在保证产物手性纯度的情况下，单位酶活提高为约30倍，具有非常高的立体选择性和转化率，可进一步降低沙库必曲和LCZ696的工业生产成本，具有良好的工业应用价值。
