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[发明专利]角膜缘干细胞及其培养方法和应用-CN201610356834.5在审
发明人：曾宪卓;鲁菲 -专利权人：深圳爱生再生医学科技有限公司
申请日： 2016-05-26 - 公布日： 2016-09-21 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种角膜缘干细胞及其培养方法和应用，其中，该角膜缘干细胞的培养方法包括步骤如下：获取可增殖角膜缘组织；将所述可增殖角膜缘组织加入含FBS和Ca²⁺的MEM培养基中培养；其中，所述Ca²⁺在所述含FBS和Ca²⁺的MEM培养基中的浓度为0.01～0.09mmol/L。本发明角膜缘干细胞的培养方法可以抑制角膜缘干细胞的分化，避免角膜缘干细胞因分化而产生其他细胞，保证培养得到的角膜缘干细胞的纯度，降低分化程度，从而提高了移植角膜缘干细胞治疗相应眼部疾病的疗效。
角膜干细胞及其培养方法应用

[发明专利]一种口腔黏膜上皮干细胞的分离培养方法-CN201610338840.8在审
发明人：陈海佳;王一飞;葛啸虎;冯德龙 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2016-05-20 - 公布日： 2016-08-17 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种口腔黏膜上皮干细胞的分离培养方法。该分离培养方法包括：将口腔黏膜上皮组织采用胰酶消化后，再采用中性蛋白酶消化，终止消化后进行细胞培养，获得口腔黏膜上皮干细胞。本发明提供的分离培养方法可有效缓解酶剧烈消化组织对细胞的损伤，从而可获得更多数量且活力高的口腔黏膜上皮干细胞。
一种口腔黏膜上皮干细胞分离培养方法

[发明专利]用于牙髓干细胞采集、分离、扩增的试剂盒及其使用方法-CN201610254625.X在审
发明人：韩洪起;鲁振宇;刘俊江;张冰晶;秦臻;徐悦 -专利权人：天津普瑞赛尔生物科技有限公司
申请日： 2016-04-21 - 公布日： 2016-07-27 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于牙髓干细胞采集、分离、扩增的试剂盒及其使用方法，包括采集牙齿预处理包、牙髓干细胞分离包和牙髓干细胞培养扩增添加液；牙髓干细胞培养扩增添加液包括100‑500ml DMEM培养基中含有体积分数15‑20％的FBS、100‑150IU/ml的表皮细胞生长因子EGF、100‑150IU/ml的碱性成纤维细胞生长因子bFGF。本发明能够对儿童脱落的乳牙或者成人智齿进行及时的处理，并能够快速、高效的从中分离出牙髓干细胞进行培养扩增，应用此试剂盒配合DMEM或者AMEM基础培养基以及FBS，能够实现牙髓干细胞的分离、培养及大规模扩增。
用于牙髓干细胞采集分离扩增试剂盒及其使用方法

[发明专利]一种基于集落刺激因子1对干细胞的活化方法-CN201610122921.4在审
发明人：刘小青 -专利权人：佰通生物技术(苏州)有限公司
申请日： 2016-03-04 - 公布日： 2016-06-29 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开一种基于集落刺激因子1对干细胞的活化方法，本发明利用CSF1对干细胞动员、增殖以及激活，CSF1不仅可以促进干细胞的体外增殖，还可促进体内干细胞的动员、增殖与活化，有望在细胞培养、疾病治疗以及抗衰老保健中发挥重要作用。
一种基于集落刺激因子干细胞活化方法

[发明专利]干细胞载体以及利用其的三维定制型骨成形方法-CN201410686326.4在审
发明人：李在濬 -专利权人：以希杰株式会社
申请日： 2014-11-25 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞载体以及利用其的三维定制型骨成形方法。更详细地涉及干细胞储存体，并揭示利用多孔性的生物相容性材料构成立方体，具体地形成多数通孔通道，从而能够使干细胞以最佳的条件培养的结构体。
干细胞载体以及利用三维定制成形方法

[发明专利]高效诱导成体细胞表观重编程的试剂盒及其方法-CN201410659675.7在审
发明人：潘兴华;朱向情;陈强 -专利权人：朱向情
申请日： 2014-11-18 - 公布日： 2016-06-15 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：高效诱导成体细胞表观重编程方法及试剂盒，属于细胞生物技术领域。该方法及其试剂盒针对现有成体细胞重编程方法存在的问题，发明了一种利用天然活性物质—鱼卵母细胞提取物为诱导剂，高效诱导成体细胞表观重编程为诱导多能干细胞的方法，可用于动物多能干细胞的制备。本发明涉及的方法及试剂盒能够高效诱导动物成体细胞重编程为诱导多能干细胞，与其它方法相比，该方法对成体细胞的重编程效率高，诱导方法简单、安全性好、成本较低，本发明方法解决了多能干细胞来源困难的问题，在再生医学等领域具有广阔的临床应用价值和前景。
高效诱导成体细胞表观编程试剂盒及其方法

[发明专利]经血源宫内膜干细胞的分离培养方法-CN201610077491.9在审
发明人：陈海佳;王一飞;葛啸虎;马岩岩;王小燕 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2016-02-03 - 公布日： 2016-06-01 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞领域，特别涉及经血源宫内膜干细胞的分离培养方法。该方法利用女性经血作为干细胞采集来源，废物利用，变废为宝，来源丰富；月经血中富含宫内膜干细胞的数量为骨髓的30倍有效成分含量丰富；采用经血保存液进行保存，避免经血在采集到分离的过程中受外界污染。本发明采用隔层离心管和细胞贴壁方法相结合对宫内膜干细胞进行分离，并利用无血清培养基培养，操作简单，成本更低，同时可以得到纯度较高、数量较多、分化能力较强的经血宫内膜干细胞。
经血宫内干细胞分离培养方法

[发明专利]干细胞培养基及培养宫内膜干细胞的方法-CN201610078092.4在审
发明人：戴玲华;戴唯悠 -专利权人：杭州易文赛生物技术有限公司
申请日： 2016-02-04 - 公布日： 2016-05-18 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明提供了一种干细胞培养基及使用该干细胞培养基培养宫内膜干细胞的方法，所述的办法包括将采集到的经血与子宫内膜组织分开收集，然后分别用本发明提供的干细胞培养基进行培养分别得到经血贴壁细胞和子宫内膜贴壁细胞，再将经血贴壁细胞和子宫内膜贴壁细胞于细胞培养瓶培养，用胰酶消化收集贴壁细胞，接种于细胞共培养皿，再用本发明提供的干细胞培养基进行培养。该干细胞培养基成分简单，添加成分较少，成本较低；体外培养20代以上，细胞不易出现衰老、退化现象，能长久维持干细胞的活性与干性；干细胞培养方法简单、有效，细胞增殖效率快，体外培养倍增时间仅20小时左右；且细胞能够稳定扩增50代。
干细胞培养基培养宫内方法

[发明专利]一种猪极小胚胎样干细胞分离与纯化方法-CN201510909419.3在审
发明人：顾翔;李碧春;顾健;孙加斌;金凯;蒋一秀;罗雪;朱业;孙磊;胡茂志;石青青;朱睿;王竟悟;顾艺荀;苗书航 -专利权人：江苏省苏北人民医院
申请日： 2015-12-10 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速有效的极小胚胎样干细胞(very small embryonic-like stem cells，VSELs)分离和纯化方法，包括以下步骤：1. 猪骨髓液红细胞裂解后经含FBS的RPMI 1640培养基重悬细胞分离出猪骨髓总单个核细胞；2. 加入FcR封闭液，耦合CD133抗体或Lin抗体的免疫磁珠，过柱分选，获得猪骨髓CD133（+）或Lin（-）细胞群；3. 采用CD133、CD45、Lin抗体标记流式细胞分选术获得猪骨髓CD133 (+) Lin (-) CD45 (-)极小胚胎样干细胞。本发明具有高效率、高纯度、高度稳定等优势，是首次分离、纯化出偶蹄类动物猪的VSELs，丰富了现有的干细胞库，有利于对大型偶蹄动物VSELs进一步研究，使VSELs更接近于临床应用。
种猪极小胚胎干细胞分离纯化方法

[发明专利]一种猪极小胚胎样干细胞培养与鉴定方法-CN201510985992.2在审
发明人：顾翔;李碧春;顾健;孙加斌;金凯;蒋一秀;罗雪;朱业;孙磊;胡茂志;石青青;朱睿;王竟悟;顾艺荀;苗书航 -专利权人：江苏省苏北人民医院
申请日： 2015-12-25 - 公布日： 2016-03-30 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞培养与鉴定技术领域，尤其涉及一种偶蹄类动物猪极小胚胎样干细胞的培养与鉴定方法，技术内容包括：1.分离同种乳猪成肌细胞并制备成肌细胞饲养层；2.接种分离的猪骨髓极小胚胎样干细胞于成肌细胞饲养层，用RPMI 1640培养基进行培养，并添加细胞因子进行培养扩增极小胚胎样干细胞；3.采用形态学、免疫荧光和基因水平系列鉴定极小胚胎样干细胞。发明提出的极小胚胎样干细胞的高效培养方法和精准的鉴定步骤具有巨大的应用前景，为极小胚胎样干细胞的进一步研究提供了重要的技术保障。
种猪极小胚胎干细胞培养鉴定方法

[发明专利]一种牙周膜干细胞体外扩增完全培养基及方法-CN201510801735.9在审
发明人：王一飞;陈海佳;葛啸虎;麦锦连 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2015-11-18 - 公布日： 2016-03-23 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及一种牙周膜干细胞体外扩增完全培养基及方法，所述完全培养基包含FBS、L-谷氨酰胺、NEAA和基础培养基，所述基础培养基为高糖DMEM。所述体外扩增方法包括使用微载体和上述的完全培养基扩增牙周膜干细胞的步骤。本发明完全培养基的组分包含NEAA、L-谷氨酰胺、FBS和高糖DMEM，提高了血清含量，且使用高糖培养，添加NEAA，是本发明完全培养基的营养更佳丰富，可以有效克服现有技术中培养基容易耗尽的问题。本发明牙周膜干细胞体外扩增方法使用微载体扩增牙周膜干细胞，增殖速度快，扩增后获得的细胞数量多，而且劳动强度小，不易污染。
一种牙周膜干细胞体外扩增完全培养基方法

[发明专利]神经损伤治疗用移植材料的制造方法-CN201480027878.2在审
发明人：手塚建一;川口知子;国贞隆弘;柴田敏之;福光秀文;古川昭荣 -专利权人：株式会社再生医疗推进机构
申请日： 2014-05-14 - 公布日： 2016-03-02 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明的目的在于提供对于因神经损伤而引起的功能障碍具有高恢复效果的移植材料的、有效且重复再现性良好的制造方法。本发明提供神经损伤治疗用移植材料的制造方法等，该方法包括步骤：在实质不含FGF2以外的生长因子的培养基中，培养牙髓干细胞。
神经损伤治疗移植材料制造方法

[发明专利]促进根尖周炎骨愈合的干细胞培养方法及干细胞应用-CN201510854427.2在审
发明人：陈莉莉;伍妍;黄芳;周鑫;余少玲 -专利权人：华中科技大学同济医学院附属协和医院
申请日： 2015-11-27 - 公布日： 2016-02-17 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了促进根尖周炎骨愈合的干细胞培养方法及干细胞应用，包括采集健康的牙齿、牙髓分离、牙髓干细胞DPSC培养、传代培养、缺氧处理，缺氧处理后进行RealTime-PCR和Western Blot法检测缺氧DPSC细胞的成血管及成骨的相关基因和蛋白表达情况。本发明通过对原代培养DPSC进行缺氧预处理，有效提高其成骨及成血管基因的表达效应，能够显著提高成体干细胞移植修复根尖周炎骨缺损的疗效。
促进根尖周炎骨愈合干细胞培养方法应用

[发明专利]临床治疗级细胞治疗用毛囊干细胞细胞外基质筛选培养方法-CN201510753239.0在审
发明人：朱宁文;王凌仪;贾正;亓发芝;李伟;刘天一;任捷;苏丽娜;刘建兰 -专利权人：复旦大学附属华山医院
申请日： 2015-11-08 - 公布日： 2016-01-20 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了临床治疗级细胞治疗用毛囊干细胞的培养、筛选、扩增技术，这些瓶颈一直是生物学干细胞领域研究热点和难点，目前利用基底膜显著黏附特性进行分离纯化，采用三维培养扩增手段获得。该发明适合依赖扩增贴壁型细胞并提供三维高拟体内细胞外基质系统进行目标细胞水平的筛选与分离。高模拟体内贴附环境，体外培养成体(胚胎皮肤)干细胞的生物细胞新培养技术。高模拟底物所在环境黏附筛选培养目标组织工程皮肤种子毛囊细胞，具有高传代能力，高增殖能力，并可在体外环境下形成分化皮层结构。筛出免疫原性细胞安全获得免疫逃逸，延长移植时间增加组织工程临床应用，促进创面愈合与皮肤疾病提供了绝对优势临床治疗级细胞的解决方案。
临床治疗细胞毛囊干细胞基质筛选培养方法

[发明专利]AcSDKP在角膜缘干细胞分离培养中的应用及角膜缘干细胞的培养方法-CN201510788261.9在审
发明人：葛啸虎;陈海佳;王一飞;吴子杰;张维敏 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2015-11-16 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及AcSDKP在角膜缘干细胞分离培养中的应用及角膜缘干细胞的培养方法。本发明提供的培养基中，以胎牛血清促进角膜缘干细胞的生长，以AcSDKP抑制成纤维细胞的生长。因此，采用本发明提供的培养基能够具有选择性的分离角膜缘干细胞，且分离培养所得的角膜缘干细胞的纯度和数量皆较高，且由于成纤维细胞的生长受到抑制，角膜缘干细胞受到成纤维细胞分泌物的影响较少，干性保持良好。实验表明，采用本发明提供的培养基分离角膜缘干细胞，细胞中抗体CX43的阳性率为0.1％，AE5的阳性率为0.3％，BrdU的阳性率为50.3％，PCNA的阳性率为45.9％。该效果显著优于现有技术。
acsdkp 角膜干细胞分离培养中的应用方法