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[发明专利]一种培养人参干细胞的方法-CN202110424785.5有效
发明人：高秀君;刘冰;张明臣;闫培生 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种培养人参干细胞的方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；(3)将步骤(2)经渗透剂溶液处理的人参不定根根尖置于干细胞诱导培养基中培养，然后转入扩繁培养基中培养，获得人参干细胞；(4)将步骤(3)获得的人参干细胞转入干细胞液体培养基，暗培养获得人参干细胞。采用本发明的液体培养基和培养方法，能够直接通过成熟人参的各个部分诱导产生不定根，在简化诱导步骤、缩短诱导时间的同时提高不定根中人参皂苷的含量，最终获取指标良好的人参干细胞。
一种培养人参干细胞方法

[发明专利]海带配子体克隆常规培养过程中快速除菌方法-CN202010862367.X有效
发明人：李晓捷;罗世菊;孙娟;赵聚萍;李霞;赵楠;史良;赛珊;梁广津;王伟伟 -专利权人：山东东方海洋科技股份有限公司
申请日： 2020-08-25 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种海带配子体克隆常规培养过程中快速除菌方法，将附菌严重的配子体克隆团连同培养液倒入已消毒的容器中，然后将经过消毒的循环泵移入容器中，充气打散附菌克隆团，然后静置并换水将细菌分离除去。本发明方法最大特点是操作简便，快速高效；通过循环泵，一举两得，既除去细菌，又将克隆团打散，有利于配子体更快生长。
海带配子体克隆常规培养过程快速方法

[发明专利]一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法-CN201810035190.9有效
发明人：郭美锦;宋云飞;陈雨霞;王泽建;李杰;杨文国;庄英萍;储炬;肖慈英 -专利权人：华东理工大学;桂林莱茵生物科技股份有限公司
申请日： 2018-01-15 - 公布日： 2022-06-21 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，在以初代罗汉果悬浮细胞体系培养成熟罗汉果悬浮细胞过程中控制钾离子浓度为100～2000mg/kg，钾钠离子浓度比为5～20:1。本发明方法提高罗汉果生长量、比生长速率和罗汉果甜甙v的产量以及合成速率，利于罗汉果悬浮细胞生长和罗汉果甜甙v的市场化大规模生产；同时有效地缩短了细胞的生产培养周期，以人工方式调节罗汉果悬浮细胞生物量和罗汉果甜苷V的生产过程，有利于产品的质量控制管理。
一种通过胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长提升含量方法

[发明专利]用于植物细胞培养的组合物和方法-CN202080052848.2在审
发明人： L·L·布埃诺;P·M·厄尔布尔;L·S·德苏萨卢兹 -专利权人：盖利公司
申请日： 2020-05-22 - 公布日： 2022-06-17 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：提供了用于制备植物细胞组合物的组合物、试剂盒和方法。还提供了用于对植物细胞进行工程化的组合物、试剂盒和方法。在一些情况下，本文所提供的组合物、试剂盒和方法可以用于产生棉花。
用于植物细胞培养组合方法

[发明专利]一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法-CN202110424845.3有效
发明人：刘冰;高秀君;闫培生;张明臣 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-06-17 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；(3)将步骤(2)经渗透剂溶液处理的人参不定根根尖置于干细胞诱导培养基中培养，然后转入扩繁培养基中培养；(4)将步骤(3)扩繁培养的人参干细胞接种至干细胞液体培养基摇瓶中，以100‑140rpm的条件避光培养；(5)将步骤(4)摇瓶培养后的人参干细胞接种至生物反应装置中，避光培养，获得人参干细胞；本发明获得了所需时间更短、步骤更简单的从成熟人参获得不定根，进而得到人参干细胞的方法，并采用适宜的生物反应装置进行扩大培养，干细胞的增长倍数高，干细胞中有效成分含量高。
一种利用生物反应装置培养人参干细胞方法

[发明专利]一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法-CN202110424837.9有效
发明人：刘冰;高秀君;闫培生;张明臣 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-06-14 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；(3)将步骤(2)经渗透剂溶液处理的人参不定根根尖置于干细胞诱导培养基中培养，然后转入扩繁培养基中培养；(4)将步骤(3)扩繁培养的人参干细胞接种至干细胞液体培养基摇瓶中，以100‑140rpm的条件避光培养；(5)将步骤(4)摇瓶培养后的人参干细胞接种至生物反应装置中，避光培养，获得人参干细胞；本发明获得了所需时间更短、步骤更简单的从成熟人参获得不定根，进而得到人参干细胞的方法，并采用适宜的生物反应装置进行扩大培养，干细胞的增长倍数高，干细胞中有效成分含量高。
一种利用生物反应装置培养人参干细胞方法

[发明专利]一种应用于多品种的柑橘细胞核提取方法-CN202210259774.0在审
发明人：刘宁鸽;马海杰;梁慧玲;孙学鹏;徐海仁;黄素亚;孟心月;李通;徐燕娜 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种应用于多品种的柑橘细胞核提取方法，包括如下步骤：配置好所需裂解液和灭菌相关容器；将柑橘幼嫩的叶片材料迅速用液氮浸没固定，快速充分研磨，加入到裂解液中充分混匀；使用Miracloth分离细胞核与其他非核材料；离心过滤液，不同大小离心管离心参数有差异,离心整个过程中，通过处理过的宽口枪头吸打，逐步分离叶绿体等杂质，对细胞核与其他非核材料进行精细分离，最终得到所需质量和浓度的细胞核；本发明中所提供的柑橘细胞核提取方法，使用范围广，可适用于十余种柑橘品种，能够去除叶绿体污染又对细胞核破坏较低，细胞核的纯度得到提高，且提取浓度高。
一种应用于品种柑橘细胞核提取方法

[发明专利]一种香草兰脱毒种苗的高通量繁育方法-CN202111321470.4有效
发明人：吉训志;秦晓威;王辉;赵青云;闫林;邢怡彰;初众;唐冰;吴刚;李付鹏 -专利权人：中国热带农业科学院香料饮料研究所
申请日： 2021-11-09 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种香草兰脱毒种苗的培养基组合，其特征在于，包括无菌种子萌发培养基、丛生芽诱导培养基和增殖生根培养基；所述无菌种子萌发培养基包括：0.3～1.0mg/L 6‑BA、0.1～1.0mg/L NAA和0.1～0.5mg/L GA3；所述丛生芽诱导培养基包括：1.0～2.5mg/L 6‑BA和0.1～0.5mg/LNAA；所述增殖生根培养基包括：0.1～0.5mg/L NAA和0.05～0.1mg/L GA3。本发明以特定的消毒手段保证香草兰组织无病毒感染，为香草兰脱毒苗再生提供无菌种子为外植体材料及特定的诱导培养基，并获得丛生芽，提高了种苗繁育效率及获得大量状态一致的脱毒组培苗，对日后的香草兰脱毒种苗的高通量繁育具有重要意义。
一种香草脱毒种苗通量繁育方法

[发明专利]一种刺五加细胞瞬时转化的方法-CN202210201087.3在审
发明人：范桂枝;高兴蕾;王滋涵;由香玲;詹亚光 -专利权人：东北林业大学
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明是一种利用酶解法获得刺五加愈伤组织单细胞，并对其进行农杆菌转化获得转GFP基因的方法，它属于生物技术领域。采用1.5％纤维素酶R‑10和0.2％离析酶R‑10酶解刺五加愈伤组织6h后400×g离心5min时，单细胞产量最大、活力最强，分别为1.88×106个·g‑1和90％。40％PEG浓度下农杆菌转化单细胞40min时，单细胞瞬时转化效率达30.34％。本发明提供了一种高产刺五加单细胞的酶解体系，同时获得了一致的转GFP基因的单细胞，该发明将为从单细胞水平研究基因的功能，为基因在不同种类细胞中的功能分析提供技术支撑。
一种刺五加细胞瞬时转化方法

[发明专利]落叶松原生质体分离纯化及瞬时表达方法-CN202010619007.7有效
发明人：张勇;郑雪莲;刘炳麟 -专利权人：电子科技大学
申请日： 2020-06-30 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及落叶松原生质体分离纯化及瞬时表达系统构建的方法。本发明要解决的技术问题是至今为止尚未见到适用于落叶松的原生质体制备的方法。本发明的技术方案是落叶松原生质体分离纯化的方法，包括如下步骤：a、酶解；b、收集；在此基础上，本发明还提供了落叶松瞬时表达系统构建的方法。本申请建立了一套适用于落叶松的原生质体制备方法，可实现高效率的落叶松原生质体瞬时转化。
落叶松原生质体分离纯化瞬时表达方法

[发明专利]一种高效诱导小麦花药出愈的培养基-CN202210334792.0在审
发明人：王海波;张俊敏;周硕;吕孟雨;董福双;刘永伟;赵和;柴建方;张洪伟;马秀英;李雯;马琳峰;吕爱枝 -专利权人：河北省农林科学院生物技术与食品科学研究所
申请日： 2022-03-31 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及花培育种技术领域，提出了一种高效诱导小麦花药出愈的培养基，调整氮源：去掉无机还原态氮，将还原态氮调整为有机还原态氮，所述有机还原态氮包括L‑谷氨酰胺、L‑精氨酸或所述有机还原态氮包括L‑谷氨酰胺、L‑精氨酸、L‑天冬素、甘氨酸；和/或调整碳源：将蔗糖调整为葡萄糖。通过调整氮源和/或调整碳源，显著提高了小麦花药的出愈率。利用本发明设计的PCI培养基，以小麦品种‘金禾9123’、‘科农199’为试材，与当前人们认为最好的小麦花药培养基相比，出愈率至少可提高20个百分点，出愈时间大约提早一周，愈伤组织的生长速度快，表现了大幅度提升育种应用时可捕捉较多基因重组体和提高获得单倍体效率的优越性。
一种高效诱导小麦花药培养基

[发明专利]一种人参干细胞的分离培养方法-CN202110424330.3有效
发明人：刘冰;高秀君;闫培生;张明臣 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种人参干细胞的分离培养方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，解剖分离获取干细胞区域；(3)将步骤(2)经分离获取的干细胞接种至干细胞诱导培养基中暗培养，获得干细胞团，再将所述干细胞团转入继代培养基中暗培养；(4)将步骤(3)经继代培养的干细胞接种至干细胞液体培养基中，暗培养，获得人参干细胞。采用本发明的液体培养基和培养方法，能够直接通过成熟人参的各个部分诱导产生不定根，在简化诱导步骤、缩短诱导时间的同时提高不定根中人参皂苷的含量，最终获取指标良好的人参干细胞。
一种人参干细胞分离培养方法

[发明专利]一种植物外泌体的纯化方法-CN202210205644.9在审
发明人：邹衡芳;周晗;陈宁;赖云;来昌冲 -专利权人：广州远想医学生物技术有限公司
申请日： 2022-03-02 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于外泌体分离技术领域，公开了一种植物外泌体的纯化方法，以期克服现有方法中外泌体活性不足、分离提取量少、纯度不高的技术问题。本发明的植物外泌体的纯化方法包括：收集植物细胞破碎液，离心收集上清液；向上清液中加入沉淀液，得混合液；将混合液离心，弃上清，收集沉淀，加入PBS完全溶解沉淀，得溶解液；将溶解液进行凝胶过滤层析分离，即得外泌体。本发明的方法通过PEG8000沉淀与凝胶过滤层析联合实现大规模和高纯度外泌体的分离纯化，能够同时保证外泌体的含量、纯度、生物活性，所分离的外泌体产量高，纯度高；本发明的方法效率高，操作简单，易大规模生产。
种植物外纯化方法

[发明专利]一种制备高质量地黄原生质体的方法-CN202210137430.2在审
发明人：杨艳会;杨慕荣;董柯炜;崔柳青;李瑞芳;张高阳;伊艳杰;谭曦;王驰 -专利权人：河南工业大学
申请日： 2022-02-15 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备高质量地黄原生质体的方法，包括如下步骤：(1)地黄叶片预处理：取地黄幼苗叶片，剪成细条状，置于缓冲液中避光浸泡处理；(2)酶解：将预处理后的地黄叶条转移到酶解液中，避光振荡酶解；(3)原生质体分离；(4)原生质体纯化：分离的原生质体使用缓冲液重悬；重悬后液体添加于蔗糖盐溶液上层，离心；离心后中层为原生质体带。本发明方法简单，制备的原生质体形态规则，结构完整，活体原生质体含量高、质量好，为利用地黄原生质体作为实验材料进行遗传转化、快速繁殖、体细胞杂交、优良品种的选育等遗传与分子生物学领域的研究奠定基础。
一种制备质量地黄原生质体方法

[发明专利]一种长春花来源外泌体纳米囊泡及其在免疫调节方面的应用-CN202210175883.4在审
发明人：于荣敏;朱建华;欧筱争 -专利权人：于荣敏
申请日： 2022-02-25 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及具有免疫活性的长春花外泌体纳米囊泡及其制备方法，所述包括长春花外泌体纳米囊泡包括长春花叶片来源外泌体样纳米囊泡、长春花茎形成层干细胞来源外泌体样纳米囊泡、长春花叶片愈伤组织来源外泌体样纳米囊泡、长春花茎来源外泌体样纳米囊泡。本发明提取得到的长春花植物来源外泌体囊泡能够人工模拟消化系统中维持稳定，并在强酸强碱及酶消化调节下依然发挥免疫调节活性。
一种长春花来源外泌体纳米及其免疫调节方面应用