[发明专利]装载有替莫唑胺和Pep-1的聚多巴胺纳米颗粒的构建方法

权利要求书

1.一种装载有替莫唑胺和Pep-1的聚多巴胺纳米颗粒的构建方法，其特征在于，所述的构建方法具体为：

步骤一、PDA的合成：

将5mg的多巴胺加入到10ml的Tris-HCI缓冲液中，在常温下振荡8h，然后通过超速离心机得到PDA；

步骤二、替莫唑胺-聚多巴胺，即TMZA-PDA的合成：TMZA是TMZ在体内的活性代谢物具有与TMZ相同的细胞毒性，替莫唑胺酸TMZA的羧基与二胺连接臂缩合，其中TMZA首先与NH₂-PEG-NH₂进行反应，使得TMZA末端拥有的氨基-NH₂，能够与PDA反应，同时加入DCC及DAMP进行催化，将替莫唑胺TMZA修饰到聚多巴胺PDA上，具体的过程为：

2.1，在20mL的Tris-HCl缓冲液中溶解连有连接臂的TMZA，并添加20mgPDA；

2.2，在25℃下搅拌6h后，以14000rpm离心15分钟，得到PDA-TMZA；盐酸替莫唑胺酸TMZ与替莫唑胺TMZA具有相同的细胞毒性，TMZA与NH₂-PEG-NH₂反应，使得TMZ具有了氨基，进一步利用PDA中的活性基团可与氨基发生迈克尔加成反应、席夫碱反应的原理，使化疗药物功能性装载到PDA上得到PDA-TMZA；

步骤三、Pep-1-TMZA-PDA的合成：

Pep-1的合成参数：NH₂-CGEMGWVRC-SH；氨基酸残基数：9个；序列：Cys-Gly-Glu-Met-Gly-Trp-Val-Arg-Cys；分子量：1040.26g/mol；等电点：6.2PH＝7时静电荷为-0.1；平均亲水性：-0.2；亲水残基比例：22％；

利用Pep-1结构中半胱氨酸残基侧链的巯基-SH，按2.2的步骤将Pep-1装载到PDA表面，得到Pep-1-TMZA-PDA。

2.根据权利要求1所述的一种装载有替莫唑胺和Pep-1的聚多巴胺纳米颗粒的构建方法，其特征在于，采用10mM、pH＝8.5的Tris-HCI缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种装载有替莫唑胺和Pep-1的聚多巴胺纳米颗粒的构建方法，其特征在于，所述的超速离心机设置为12000rpm，20min。

4.一种如根据权利要求1所述的一种装载有替莫唑胺和Pep-1的聚多巴胺纳米颗粒的构建方法制备的纳米颗粒。