[发明专利]表达PMT蛋白的培养基及培养方法

权利要求书

1.发酵培养基，其特征在于，包括10～15g/L蔗糖，20～25g/L多价蛋白胨，20～25g/L酵母粉，5～10g/L KH₂PO₄，4～8g/L MgSO₄。

2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，还包括消泡剂。

3.如权利要求2所述的发酵培养基，其特征在于，所述消泡剂的体积百分含量为0.02％-0.03％。

4.培养基组合，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的发酵培养基以及种子培养基。

5.如权利要求4所述的培养基组合，其特征在于，所述种子培养基包括甘油5g/L，胰蛋白胨12g/L，酵母浸粉24g/L，KH₂PO₄ 2.31g/L，K₂HPO₄16.43g/L，pH调至7.5。

6.如权利要求1至3任一项所述的发酵培养基、如权利要求4或5所述的培养基组合在发酵生产PMT蛋白或PMT类毒素疫苗中的应用。

7.提高菌种表达PMT蛋白的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：挑取菌种接种于种子培养基，进行种子培养；

步骤2：取步骤1制得的种子液接种于发酵培养基，进行发酵培养，收集培养液；

所述种子培养基包括甘油5g/L，胰蛋白胨12g/L，酵母浸粉24g/L，KH₂PO₄2.31g/L，K₂HPO₄16.43g/L，pH调至7.5；

所述发酵培养基包括10～15g/L蔗糖，20～25g/L多价蛋白胨，20～25g/L酵母粉，5～10g/L KH₂PO₄，4～8g/L MgSO₄。

8.如权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养包括如下步骤：

步骤A：取所述种子液，接种于所述发酵培养基，pH7.0培养，通过20～200L/Min，转速100～800RPM维持溶氧在30～40％通气量；待OD生长至5时降温至25℃；

步骤B：待OD至7时，经第一次诱导，维持溶氧在60％以上，一次诱导2h后进行第二次诱导；甘油用溶氧反馈补加方式每次补加0.5％。

9.如权利要求/所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养具体包括如下步骤：

步骤A：取所述种子液，接种于所述发酵培养基，37℃培养，pH7.0，罐压0.02MPa，初始通气量20L/min，转速100rpm，校正溶氧100％，待溶氧下降至20％后，转速提升至400RPM之后，通气量20～200L/Min，转速100～800RPM维持溶氧在30～40％通气量；待OD生长至5时降温至25℃；

步骤B：待OD至7时，加入0.2mmol/L IPTG进行第一次诱导，维持溶氧在60％以上，一次诱导2h后加0.2mmol/L IPTG进行第二次诱导；

溶氧自然回升10％和/或每次诱导时一次性补加0.5％甘油；

批次甘油总消耗量约为2％左右。

10.如权利要求8或9所述的培养方法，其特征在于，所述种子培养包括一级培养和二级培养；

所述一级培养包括如下步骤：在平板上将1环菌落(每环5-10个单菌落)接种200ml所述种子培养基，于37℃、145rpm培养8h，种子OD₆₀₀生长至3～4，pH6.4～6.7，镜检无杂菌，菌体处于对数生长中期达到移种条件；

所述二级培养包括如下步骤：按照5％接种量(活菌数40亿cfu/ml)接入上述发酵培养基，于37℃、145rpm培养14h，种子OD 2.5～3.5，pH 6.7-6.9，镜检无杂菌，菌体处于对数生长中期达到移种条件。