[发明专利]一种可快速检测林可霉素的胶体金试纸条的制备方法

说明书

本发明适用牛奶检测技术领域，提供一种可快速检测林可霉素的胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：制备胶体金：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；金标抗体的pH调节；金标抗体的pH的进一步优化；抗原优化；抗原加标优化确定试纸条；本发明确定了制备试纸条的最优条件为：1mL胶体金溶液，5μL的0.1mol/L的K₂CO₃进行调pH，抗体添加量为1μg，金标抗体添加量为4μL,抗原稀释10倍进行划膜；本发明制备的试纸条与磺胺二甲嘧啶、诺氟沙星、庆大霉素、新霉素、头孢氨苄、头孢噻呋、青霉素G没有交叉反应，本发明的试纸条的检测灵敏度高，特异性好。

技术领域

本发明属于牛奶检测技术领域，尤其涉及一种可快速检测林可霉素的胶体金试纸条的制备方法。

背景技术

林可霉素(lincomycin,LIN)是林可链霉菌产生的林可酰胺类抗生素，能有效抑制革兰氏阳性菌，被广泛地应用于饲料和畜牧业，用于动物的增重以及奶牛乳房炎的治疗。但是由于在牛奶的生产中不规范使用药物并在用药期间采集牛乳，导致牛乳中存在林可霉素药物残留，人们长期饮用这种含林可霉素残留的牛奶，会使林可霉素残留在人体内累积从而导致细菌耐药性。

目前，国内外对于林可霉素残留量的检测方法主要使用仪器法，免疫学法较少。仪器法的检测限、灵敏度以及准确度都比较好，但是，由于仪器法所使用的仪器设备很复杂、对检测样品要进行预处理并且操作过程很费时，对检验员的技能要求比较高，不适合对大批样本进行现场筛查。免疫胶体金技术利用抗原抗体的特异性反应，通过金标示踪物的直观显色变化而确定实验结果。本发明的目的是研制一种可以快速检测牛奶中林可霉素的胶体金试纸条。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种可快速检测林可霉素的胶体金试纸条的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供一种可快速检测林可霉素的胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：

制备胶体金：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；金标抗体的pH调节；金标抗体的pH的进一步优化；抗原优化；抗原加标优化确定试纸条。

优选地，所述制备胶体金的操作步骤如下：

先用双蒸馏水将1％的氯金酸稀释100倍，再取100mL稀释液用恒温电磁搅拌器将溶液加热至沸腾，在持续搅拌下迅速加入2.5mL的1％柠檬酸三钠溶液，当溶液颜色呈现出均匀的酒红色时停止搅拌加热，冷却至20℃后再用双蒸馏水将溶液定容至100mL，将制备好的胶体金溶液放于4℃、避光的条件下保存。

优选地，所述金标抗体的pH调节的操作步骤为：先将抗体溶液稀释100倍备用；向胶体金溶液中加入0μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL、30μL的0.1moL/L的K₂CO₃溶液，充分混匀后静置，再加入所述稀释后的抗体溶液，进行混匀，静置，采用BSA溶液选择金标抗体1。

优选地，所述采用BSA溶液选择金标抗体溶液的操作步骤为：静置完成后再加入20μL的BSA溶液对其进行封闭，观察溶液的颜色，使溶液颜色保持不变的K₂CO₃用量为最佳用量，选取颜色接近的K₂CO₃的金标抗体1。

优选地，所述金标抗体的pH的进一步优化的操作步骤为：选取颜色接近的K₂CO₃的金标抗体溶液，在抗原稀释10倍、二抗稀释3倍的条件下，制做试纸条1，向制做出的两种试纸条1中分别加入2μL、4μL、6μL的金标抗体，添加完成后静置6min，根据其显色结果，选取显色深的金标抗体2。

优选地，所述抗原优化的操作步骤为：在抗原稀释10倍，二抗稀释3倍的条件和抗原稀释5倍，二抗稀释3倍的条件下，制备出两种试纸条2，向试纸条2分别加入2μL、4μL、6μL的抗原，静置6min后，察看试纸条显色情况，确定优化抗原。