[发明专利]一种水稻内含子及其活性鉴定方法

说明书

本发明公开了一种水稻内含子及其活性鉴定方法，水稻内含子的序列如SEQ ID NO.1，通过构建Pro::GFP、Pro+Intron+UTR::GFP、Pro+UTR::GFP三个载体来鉴定内含子的活性，结果显示，本发明的内含子DNA分子，104bp，对转录具有较好的增强效果。

技术领域

本发明涉及内含子及鉴定方法，特别涉及一种水稻内含子及其活性鉴定方法。

背景技术

真核生物基因通常由若干个外显子和内含子互相间隔连接而成。外显子是真核生物基因的一部分，它在剪切后仍会被保存下来，其中可以被翻译的部分称为编码区，不能被翻译的部分称为UTR。内含子是位于基因中外显子之间的间隔序列，为非编码序列，在剪切过程中被除去。基因转录时，外显子和内含子都被转录成前体RNA分子，进一步剪切删除内含子序列，将外显子连接起来，产生有功能的成熟RNA分子。

随着研究的不断深入，科学家发现内含子不再是无义序列，它们作为真核生物基因组的重要组分，参与基因表达、染色质结构的维持、细胞骨架的构建及动态变化等信号途径。越来越多的研究证实内含子作为调控元件扮演着重要角色，可增强目的基因的表达。因此，内含子是基因工程中重要的研究对象。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供对转录具有增强效果的内含子。

技术方案：本发明提供一种水稻内含子，序列如SEQ ID NO.1。

进一步地，所述水稻为禾本科稻属粳稻日本晴(Oryza sativa L.spp.Japonicavar.Nipponbare)。

进一步地，以水稻为禾本科稻属粳稻日本晴基因组DNA为模板，扩增得到104bp的扩增产物。

进一步地，所述扩增用的引物为序列如下：

正向F：5’-gtcggtacgcgtctctaggc-3’；

反向R：5’-ccacaaaacaagaaaaaaa-3’。

所述的水稻内含子的活性鉴定方法，包括如下步骤：

(1)先验证LOC_Os04g57220自身的启动子的活性，构建LOC_Os04g57220启动子驱动GFP的表达载体，命名为Pro：：GFP，LOC_Os04g57220自身的启动子序列为SEQ ID NO.2，

扩增引物为：

promoter-F：5’-gagtgtcgtgctccaccatgcgctaagttaaaaatagatat-3’

promoter-R：5’-ctcttcttcttaggagccatctttcggtgctcttcgctttc-3’；

(2)分析发现LOC_Os04g57220基因5’UTR区被104bp的内含子分隔，为检测内含子是否对基因表达的影响，构建启动子及包括内含子的5’UTR区序列(SEQ ID NO.3)调控GFP表达的载体，命名为Pro+Intron+UTR：：GFP，

扩增引物为：

intron-F：5’-gagtgtcgtgctccaccatgcgctaagttaaaaatagatat-3’；

intron-R：5’-ctcttcttcttaggagccatcgatcaaaccctaatcaccc-3’；

(3)为检测单独5’UTR序列对基因表达的影响，构建启动子和5’UTR序列(SEQ IDNO.4)调控GFP表达载体，命名为Pro+UTR：：GFP，

扩增引物为：