[发明专利]一种水稻内含子及其活性鉴定方法

权利要求书

1.一种水稻内含子，序列如SEQ ID NO.1。

2.根据权利要求1所述的水稻内含子，其特征在于：所述水稻为禾本科稻属粳稻日本晴(Oryza sativa L.spp.Japonica var.Nipponbare)。

3.根据权利要求2所述的水稻内含子，其特征在于：以水稻为禾本科稻属粳稻日本晴基因组DNA为模板，扩增得到104bp的扩增产物。

4.根据权利要求3所述的水稻内含子，其特征在于：所述扩增用的引物为序列如下：

正向F：5’-gtcggtacgcgtctctaggc-3’；

反向R：5’-ccacaaaacaagaaaaaaa-3’。

5.权利要求1所述的水稻内含子的活性鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)构建LOC_Os04g57220启动子驱动GFP的表达载体，命名为Pro：：GFP，LOC_Os04g57220自身的启动子序列为SEQ ID NO.2，

扩增引物为：

promoter-F：5’-gagtgtcgtgctccaccatgcgctaagttaaaaatagatat-3’

promoter-R：5’-ctcttcttcttaggagccatctttcggtgctcttcgctttc-3’；

(2)构建启动子及包括内含子的5’UTR区序列(SEQ ID NO.3)调控GFP表达的载体，命名为Pro+Intron+UTR：：GFP，

扩增引物为：

intron-F：5’-gagtgtcgtgctccaccatgcgctaagttaaaaatagatat-3’；

intron-R：5’-ctcttcttcttaggagccatcgatcaaaccctaatcaccc-3’；

(3)构建启动子和5’UTR序列(SEQ ID NO.4)调控GFP表达载体，命名为Pro+UTR：：GFP，

扩增引物为：

UTR-F：5’-gagtgtcgtgctccaccatgcgctaagttaaaaatagatat-3’；

UTR-R：5’-ctcttcttcttaggagccatcggcgacggggcgctccggc-3’；

(4)水稻原生质体的制备与转化；

(5)转化后根据荧光信号强弱对LOC_Os04g57220基因5’UTR区的104bp内含子活性进行验证。

6.根据利要求5所述的水稻内含子的活性鉴定方法，其特征在于：使用高内涵细胞成像系统进行荧光信号强弱观察。