[发明专利]使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法

说明书

本发明提供了使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，包括：小鼠适应性喂养7天，异氟烷麻醉后，背部剃毛，然后涂抹脱毛膏，10min后刮去脱毛膏及毛发，形成3‑5cm²的脱毛区域，并在除毛后的皮肤上轻刮造成皮损等步骤。本发明采用混合过敏原致敏小鼠局部皮肤，模型制备加模型初步验证时间共计40天，比单过敏原致敏7周造模周期更短，且造模严重程度更深。本发明使用小鼠品系为普通C57BL/6小鼠，价格较低，且成模率为70％以上。

技术领域

本发明属于动物实验模型构建技术领域，涉及使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法。

背景技术

皮肤瘙痒症(特应性皮炎)是一种无原发性皮肤损害的慢性皮肤病。可由某些疾病、药物、寒冷、过敏源刺激而发生，属于神经功能障碍性皮肤病，目前仍属于难治性皮肤病。临床上患者自觉剧痒，无原发性皮肤损害，发生部位不固定可全身泛发，亦可局限一定部位如：头颈、躯干、四肢、二阴，瘙痒后可引发抓痕、丘疹、血痂、皮肤增厚及苔藓样改变，病人奇痒难忍，痛苦不堪。

当前特应性皮炎的常见模型动物包括家兔，大鼠，小鼠，豚鼠，犬等，其中小鼠以成本低，模型易建立且便于基因操作等优势备受青睐。这些动物模型可分为3类：自发动物模型，致敏剂诱导模型，基因方法建立模型。

自发动物模型包括Nc/Nga小鼠，特点是普通环境下会出现严重的红斑，瘙痒，皮肤干燥，皮肤屏障功能障碍等症状，且病理表现接近人类特应性皮炎临床表现，缺点是价格昂贵，限制了其广泛应用。基因编辑模型小鼠同样因为价格昂贵，操作不便限制了其广泛应用。

致敏剂诱导模型是目前科研人员常用的得到特应性皮炎动物模型，卵清蛋白(OVA)可诱导包括balb/c和C57BL/6在内的5个品系小鼠的特应性皮炎，表现为致敏小鼠皮肤增厚，真皮层CD4⁺T淋巴细胞浸润，嗜酸性粒细胞和Th2型细胞因子IL-4，IL-5及IL-13表达的上调，但是IFN-γ水平变化很小或者无变化。尘螨是目前已发现最强的过敏源之一，其引起的过敏性疾病包括：过敏性皮炎、过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性湿疹，利用粉尘螨提取物在Nc/NGa小鼠背部和耳后诱导7周后小鼠出现特应性皮炎样皮肤炎性反应，亦有使用重组螨变应原Der P8致敏balb/c小鼠产生具有表皮增生和水肿特征的皮炎，皮肤CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞浸润，免疫学特点以Th2型免疫为主。葡萄球菌肠毒素B(SEB)是常见的超抗原，能够以极低浓度即可激活大量T细胞的活化，能加重小鼠皮炎的严重程度。这些致敏原导致的模型都需要反复致敏，找到一种缩短造模周期，且价格便宜的特应性造模方法对药物发现和疗效验证具有重要意义。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的在于提供使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，包括：

1)小鼠适应性喂养7天，异氟烷麻醉后，背部剃毛，然后涂抹脱毛膏，10min后刮去脱毛膏及毛发，形成3-5cm²的脱毛区域，并在除毛后的皮肤上轻刮造成皮损。

2)用生理盐水为小鼠清洗背部，并用消毒棉签轻擦干背部。

3)将化妆棉剪为1.5cm*1.5cm大小的化妆棉块，将100μl屋尘螨蛋白溶液及50μlSEB溶液滴于化妆棉上，将化妆棉使用胶布固定于小鼠脱毛区域，并使用胶布将其缠在小鼠腰腹位置。

4)模型制备共包含3或4轮造模处理，每轮造模处理包括两次给药，每次给药中间间隔1天，每一轮造模处理周期为9天，动物休养6天后再开始下轮造模处理，在造模处理的第40天进行模型验证。

优选地，步骤1)中，小鼠采用8w龄C57B/6N小鼠，雌雄不限。