[发明专利]使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法

权利要求书

1.使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，包括：

1)小鼠适应性喂养7天，异氟烷麻醉后，背部剃毛，然后涂抹脱毛膏，10min后刮去脱毛膏及毛发，形成3-5cm²的脱毛区域，并在除毛后的皮肤上轻刮造成皮损；

2)用生理盐水为小鼠清洗背部，并用消毒棉签轻擦干背部；

3)将化妆棉剪为1.5cm*1.5cm大小的化妆棉块，将100μl屋尘螨蛋白溶液及50μl SEB溶液滴于化妆棉上，将化妆棉使用胶布固定于小鼠脱毛区域，并使用胶布将其缠在小鼠腰腹位置；

4)模型制备共包含3或4轮造模处理，每轮造模处理包括两次给药，每次给药中间间隔1天，每一轮造模处理周期为9天，动物休养6天后再开始下轮造模处理，在造模处理的第40天进行模型验证。

2.根据权利要求1所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，其特征在于，步骤1)中，小鼠采用8w龄C57B/6N小鼠，雌雄不限。

3.根据权利要求1所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，其特征在于，步骤3)中，所述屋尘螨蛋白溶液的质量体积浓度为100μg/ml，所述SEB溶液的质量体积浓度为10μg/ml。

4.根据权利要求3所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，其特征在于，所述屋尘螨蛋白溶液通过以下方法制备：将含蛋白4.51mg的屋尘螨提取物加入4.51ml的PBS，至尘螨完全溶解，配制成1mg/ml的母液，每次使用时，用PBS稀释成100μg/ml的屋尘螨蛋白溶液；所述SEB溶液通过以下方法制备：将1mg葡萄球菌肠毒素B加入10ml的PBS，配制成100μg/ml的母液，每次使用时，用PBS稀释成10μg/ml的SEB溶液。

5.根据权利要求1所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，其特征在于，步骤4)具体包括：

4-1)第一次给药后第4天，将敷药装置解除，休养1天后再给药一次，持续4天，此时距第一次给药9天，这样的两次给药为一轮造模处理，周期为9天；

4-2)动物于第一轮造模处理结束后休养6天后进行第二轮造模处理；

4-3)动物于第二轮造模处理结束后休养6天后进行第三轮造模处理；

4-4)于第三轮造模处理结束后一天进行模型验证，如果造模效果不佳，则于第三轮造模处理结束后休养2天开始第四轮造模。

6.根据权利要求5所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，其特征在于，步骤4-1)中，第一次给药后，若皮损不严重或毛发再生，则在再次给药前再用脱毛膏进行一次皮损。

7.根据权利要求1所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法，其特征在于，所述模型验证包括皮损评分及搔抓实验：对小鼠背部造模区域的四个参数：发红，出血，喷发和脱屑进行评价，评级按以下严重性等级：0-无症状，1-轻度，2-中级，3-严重；造模第40天时，对小鼠背部特定部位进行屋尘螨蛋白和SEB混合溶液的喷施，喷施剂量与造模剂量相同，并进行为期30min的行为学观察，主要观察指标为小鼠在造模及喷施部位的抓挠次数和总抓挠时长，小鼠抓挠身上除头面外其他部位为有效，以小鼠开始抓挠到抓挠用爪重新触地或舔舐抓挠用爪计为一次；造模第40天，评分大于等于5分的为造模成功小鼠。

8.权利要求1-7任意一项所述的使用屋尘螨蛋白和SEB诱导小鼠皮肤瘙痒症模型的方法获得的皮肤瘙痒症模型在治疗皮炎和瘙痒症药物的研发中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用包括：构建皮肤瘙痒症模型后，根据分组对动物执行治疗方案，待治疗方案周期结束后，通过包括病理、生化检测在内的相关检测来确认治疗药物是否有效。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述分组包括模型组、正常对照组、阳性药物组和阴性药物组。