[发明专利]一种检测大鲵分布的环境DNA方法有效
| 申请号： | 202110403977.8 | 申请日： | 2021-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN113088574B | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 王杰;谢锋;江建平;刘萍 | 申请（专利权）人： | 中国科学院成都生物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都坤伦厚朴专利代理事务所(普通合伙) 51247 | 代理人： | 吴亦雨 |
| 地址： | 610041 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 大鲵 分布 环境 dna 方法 | ||
1.一组引物对，其特征在于：序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。
2.权利要求1所述引物对在检测大鲵中的应用。
3.一种检测大鲵分布的环境DNA方法，其特征在于：使用引物对对待测样品进行PCR扩增检测，电泳结果中出现224bp的条带，则认为待测样品来源的环境中分布有大鲵，所述引物对为Ad_Cytb_E1，序列为：SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所使用的引物对还包括Ad_Cytb_E3或Ad_Cytb_E5中的任意一对或两对，Ad_Cytb_E3的序列为：SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，Ad_Cytb_E5的序列为：SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；Ad_Cytb_E3的目标片段长度160bp；Ad_Cytb_E5的目标片段长度162bp。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：进行2个样品重复的PCR扩增检测，若两个样品重复结果不一致，则再检测一次，如果两次检测为阳性，则判定待测样品来源的环境中分布有大鲵。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：PCR扩增后，对扩增产物进行测序，将测序结果在NCBI网站用Nucleotide blast程序比对，序列第一相似结果为中国大鲵则判定待测样品来源的环境中分布有大鲵。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：PCR扩增体系为25μL，包括10μL 2 × TaqPCR Mix，12.5μL ddH2O，正反向引物各0.5μL，模板2μL，模板为提取的待测样品的DNA。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：PCR扩增反应条件为：预变性95℃ 4min，变性95℃ 40s，退火51.2℃ 60s，延伸72℃ 30s，再延伸72℃ 8min，累计35个循环。
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