[发明专利]一种用于鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的引物、试剂盒及检测方法，所述引物包括：核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的正向引物，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的反向引物，以及核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的测序引物；本发明基于待测鸡种PCR产物序列碱基位点的多态性，通过基因测序方法判定其位点等位基因，当161bp处碱基为C、223bp处碱基为A、347bp处碱基为T、376bp处碱基为A、586bp处碱基为T和/或593bp处碱基为A时，判定为黑凤鸡鸡种，当其位点没有出现上述碱基时，则判定为丝羽乌骨鸡，该方法可以100％准确的判断丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别是涉及一种用于鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

丝羽乌骨鸡是江西省泰和县特产，原产于泰和县武山北麓，根据产地又称武山鸡，因具有“丛冠、缨头、绿耳、胡须、丝毛、毛脚、五爪、乌皮、乌肉、乌骨”十大特征以及高营养价值和药用价值而闻名。丝羽乌骨鸡是著名的饮食药用鸡，全身均可入药，骨、肉及内脏均有药用价值，可以配成多种成药和方剂。

但是原种丝羽乌骨鸡，长速慢、产蛋量低，于是商业育种公司以丝羽乌骨鸡以及快长类品种为育种素材，培育了黑凤鸡。黑凤鸡又称黑乌凤鸡、黑丝毛乌鸡，其具有与丝羽乌骨鸡完全相同的十全性状，黑凤鸡屠体与丝羽乌骨鸡屠体外观并无两样，消费者无法区分。基于此，常常有不良商家以屠宰后的快长型黑凤鸡假冒优质的丝羽乌骨鸡。

目前尚没有鉴定丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的有效办法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的引物、试剂盒及检测方法，以解决上述现有技术存在的问题，本发明可准确鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

进一步地，还包括测序引物，所示测序引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明还提供一种含有上述的引物的试剂盒。

本发明还提供一种上述的引物或试剂盒在鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体中的应用。

本发明还提供一种上述的引物或试剂盒在鉴别黑凤鸡中的应用。

本发明还提供一种上述的引物或试剂盒在鉴别丝羽乌骨鸡中的应用。

本发明还提供一种用于鉴别丝羽乌骨鸡和黑凤鸡屠体的鉴别方法，包括以下步骤：

提取待测鸡种的基因组DNA，采用上述的引物对所述基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物基因序列161bp、223bp、347bp、376bp、586bp和/或593bp处碱基进行基因分型，当161bp处碱基为C、223bp处碱基为A、347bp处碱基为T、376bp处碱基为A、586bp处碱基为T和593bp处碱基为A时，所述待测鸡种为黑凤鸡。

进一步地，所述PCR产物中黑凤鸡的基因组DNA序列如SEQ ID No.4所示。

进一步地，所述PCR产物基因序列采用如SEQ ID No.3所示的测序序列进行测序。

进一步地，所述PCR扩增的扩增体系为：模板DNA 2μL，2×Eco Taq PCR SuperMix10μL，引物 0.2μL，水补至体系20μL；

扩增程序为：94℃ 5min，93℃ 40s、58℃ 30s、72℃ 90s，35个循环，72℃ 7min。

本发明公开了以下技术效果：