[发明专利]原核Argonaute蛋白的基因编辑应用

权利要求书

1.一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：该基因编辑系统包括核酸酶表达载体，所述核酸酶表达载体包括通过启动子的调控实现表达的原核Argonaute蛋白基因序列，所述核酸酶表达载体表达的原核Argonaute蛋白具有被转录本激活并靶向该转录本对应DNA序列的核酸酶活性。

2.根据权利要求1所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述原核Argonaute蛋白基因序列选自NgAgo蛋白基因序列、TtAgo蛋白基因序列或选自根据目标宿主细胞的密码子偏好优化后的NgAgo、TtAgo蛋白基因序列。

3.根据权利要求1所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述基因编辑系统还包括RNA导引激活序列表达载体，RNA导引激活序列表达载体包括通过启动子的调控实现作为所述转录本的RNA导引激活序列的表达的模板。

4.根据权利要求3所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述RNA导引激活序列选自目标宿主细胞基因组靶序列的同源序列。

5.根据权利要求3所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述RNA导引激活序列的长度大于10nt。

6.根据权利要求3所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述核酸酶表达载体中，启动子选自T7启动子、阿拉伯糖启动子或CMV启动子；所述RNA导引激活序列表达载体中，启动子选自U6类启动子。

7.根据权利要求3所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述基因编辑系统还包括与RNA导引激活序列互补配对的单链DNA片段。

8.根据权利要求7所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述基因编辑系统中，核酸酶表达载体含量按物质的量计为单链DNA片段含量的3倍以内。

9.根据权利要求1所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述基因编辑系统还包括报告载体和/或用于进行同源重组修复的供体载体，所述报告载体包括报告基因表达盒，所述报告基因表达盒包括报告基因序列以及位于该序列上游的与目标宿主细胞基因组靶序列同源的序列。

10.根据权利要求2、4或9所述一种基于pAgo的基因编辑系统，其特征在于：所述目标宿主细胞选自真核细胞。