[发明专利]糖蛋白N-糖链分析方法在审
| 申请号： | 202110361832.6 | 申请日： | 2021-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN113295778A | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 魏星任;兰万军;陈亮;梁国龙;刘友桃 | 申请（专利权）人： | 东莞太力生物工程有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N1/28;G01N27/447 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 林青中 |
| 地址： | 523560 广东省东莞*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 糖蛋白 分析 方法 | ||
1.一种糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，包括：
a)将待分析糖蛋白用2-甲基嘧啶硼烷及二硫键还原剂进行蛋白展开变性及二硫键还原处理；
b)将步骤a)处理后的蛋白烷基化处理，N-糖苷酶F酶切；
c)将酶切好的样品干燥后使用标记物标记并根据所述标记物对N-糖链进行分析；所述标记物为普鲁卡因酰胺和/或其盐。
2.根据权利要求1所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述2-甲基嘧啶硼烷以RapiGest SF溶液的形式加入，RapiGest SF终浓度为0.5mg/ml～1.5mg/ml。
3.根据权利要求1所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述二硫键还原剂为二硫苏糖醇。
4.根据权利要求1～3任一项所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，步骤a)中，待分析糖蛋白与2-甲基嘧啶硼烷及二硫键还原剂于34℃～40℃共孵育20min～40min。
5.根据权利要求1所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述标记物为普鲁卡因酰胺盐酸盐；优选的标记方法条件为于60℃～70℃下标记2～4小时。
6.根据权利要求1～3、5任一项所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述蛋白烷基化所用试剂为碘乙酰胺。
7.根据权利要求1～3、5任一项所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述N-糖苷酶F的终浓度为20U/ml～35U/ml。
8.根据权利要求1～3、5任一项所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述干燥为将酶切好的样品置于真空环境下干燥。
9.根据权利要求1～3、5任一项所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，所述待分析糖蛋白选自具有糖链的蛋白质激素、血浆蛋白、酶、抗体、补体、血型物质以及膜蛋白。
10.根据权利要求1～3、5任一项所述的糖蛋白N-糖链分析方法，其特征在于，在步骤c中，根据所述标记物对N-糖链进行分析的方法基于毛细管电泳、高效液相色谱及液质联用技术平台中的至少一种。
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