[发明专利]一种W蛋白沉默的重组新城疫病毒rVII-NJ-Wko株及其制备方法和应用

说明书

一种W蛋白沉默的重组新城疫病毒rVII‑NJ‑Wko株及其制备方法和应用，属于微生物领域，该重组新城疫病毒rVII‑NJ‑Wko株于2020年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：V202082。本发明通过新城疫病毒反向遗传操作技术和定点突变技术使该重组病毒无法表达W蛋白，拯救的重组新城疫病毒rVII‑NJ‑Wko株的MDT值为64.8h，ICPI值为1.72，EID₅₀/ml值为8.00log₁₀，HA效价为8log₂。该重组新城疫病毒rVII‑NJ‑Wko株可用于深入研究新城疫病毒W蛋白的功能和新城疫病毒W蛋白的作用机制，还可作为潜在的分子标记疫苗侯选株。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体公开了一种W蛋白沉默的重组新城疫病毒rVII-NJ-Wko株及其制备方法和应用。

背景技术

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)强毒株感染引起的一种急性、高度接触性禽类烈性传染病，是《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》中优先防制的一类动物疫病之一。近年来，我国ND呈现出新的流行病学特点：非典型性ND和免疫带毒现象普遍存在，免疫失败时有发生，直接及间接造成的经济损失巨大，ND的防控面临着新挑战，寻求防控ND的新途径已成为亟待解决的重大科学与生产实际问题(Dimitrov KM，等.Updated unifiedphylogenetic classification system and revised nomenclature for Newcastledisease virus[J].Infection Genetics and Evolution,2019,74:103917.)。

NDV为副黏病毒科副黏病毒属的禽副黏病毒I型，基因组为不分节段的单股负链RNA，基因组结构模式为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，依次编码六种结构蛋白：核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein，NP)、磷蛋白(Phosphorprotein，P)、基质蛋白(Matrix protein，M)、融合蛋白(Fusionprotein，F)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(Heamagglutinin-Neuraminidase protein，HN)和大分子蛋白(Large protein，L)；以及两种非结构蛋白(V和W)。NP、P和L作为内部蛋白参与病毒RNA的转录与复制，形成有活性的mRNA(Kho CL，等.Regions on nucleocapsid protein ofNewcastle disease virus that interact withits phosphoprotein[J].Archives ofVirology,2004,149(5):997-1005.)；M蛋白构成囊膜内表面的支撑物，驱动病毒出芽(Pantua HD，等.Requirements for theAssembly andRelease ofNewcastle Disease Virus-Like Particles[J].Journal ofVirology,2006,80(22):11062-11073.)；F和HN是形成病毒表面纤突的糖基化蛋白，是决定NDV毒力和致病性的主要因素(Ren S，等.Hemagglutinin-neuraminidase and fusionproteinsofvirulentNewcastle disease virus cooperatively disturb fusion-fissionhomeostasis to enhance mitochondrial function by activating the unfoldedprotein response of endoplasmic reticulum andmitochondrial stress[J].Veterinary Research,2019,50(1):37.)。另外，V蛋白能通过多种策略拮抗宿主天然免疫应答(Huang Z，等.Newcastle Disease Virus V Protein Is Associated with ViralPathogenesis and Functions as an Alpha InterferonAntagonist[J].JournalofVirology,2003,77(16):8676-8685.)。然而，目前有关W蛋白的功能及其作用机制并不清楚。