[发明专利]一种抗菌肽或其变体在制备抗菌产品中的应用

说明书

本发明具体涉及一种抗菌肽或其变体在制备抗菌产品中的应用。本发明目的在于开发具有良好抗菌活性的多肽，基于该目的，本发明提供了SEQ ID NO:1‑6所示的抗菌肽。经研究，上述多肽具有良好的抗微生物活性，很低的溶血性，对细菌生物膜的形成也具有很好的抑制作用，是很好的杀菌剂，因此可以作为非常具有潜力的抗微生物感染的候选药物。本发明进一步的，还提供了上述多肽的液相合成方法，制备方法简单，反应条件温和，原料廉价易得，相比一般多肽的固相合成方法，低成本，具有较高的纯度和收率，更符合绿色经济化学，具有大规模工业化生产价值。

技术领域

本发明属于抗菌肽技术领域，具体涉及一种抗菌肽或其变体、其缀合物、包含所述抗菌肽及变体的融合蛋白、编码所述抗菌肽及变体的核酸分子及组合物，还包括上述物质在制备抗菌产品中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

细菌感染对人体健康有严重威胁。在中国每年至少有300万人受到感染，直接导致约33000人死亡。特别是近年来，由于传统抗生素的滥用以及多重耐药细菌进化速度加快使得许多细菌产生耐药性。加之由于商业利益等原因，相比抗菌药物的研发速度，细菌的抗药性则以惊人的速度发展着。因此迫切需要一种新的抗菌药物来抑制细菌，尤其是多重耐药菌的生长。

抗菌肽作为天然免疫系统的重要组成部分，在过去的二十年里引起了众多研究者的广泛关注，它凭借其抗菌谱广、作用迅速、热稳定性好、不易产生耐药性等优点，已逐步发展成为生物医学、兽医学相关方面的研究热点。阳离子抗菌肽的作用方式与传统的抗生素有着明显的不同，他们作用的主要靶标是细菌的细胞膜，通过自己本身的正电荷与细菌细胞膜表面的负电荷发生静电相互吸引从而聚集在细菌表面，通过各种方式使细胞膜通透性增加逐渐失去屏障功能，最终细胞裂解致死亡。由于对这种阳离子抗菌肽产生抗药性需要使微生物细胞膜发生脂质成分的改变，这种代价是巨大的，因此针对这些膜活性的抗菌肽产生耐药性几乎是不可能的，阳离子抗菌肽有望成为新一代的抗生素。

发明内容

基于上述研究背景，本发明目的在于充分开发具有抗菌活性的多肽，特别是具有高效杀菌能力及膜活性、且溶血性低的抗菌肽产品，有助于解决临床菌株耐药的棘手状况。基于上述技术目的，本发明提供以下技术方案：

本发明第一方面，提供一种抗菌肽或其变体，所述抗菌肽的C端具有RRRRR片段，其N端选自以下序列中一种或几种的组合：

(1)KAIHRLI或KAIHRLI；

(2)GLFSAG、FLFSAG；

(3)FIIG、FHIIG、FIHIIG、FIHHII、FIHHIIG中的一种或其增加、减少或替换一到两位氨基酸后的序列；

所述变体与所述抗菌肽中相异仅在于1个或几个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个)氨基酸残基的置换(例如，保守置换或非保守置换)，且保留了其所源自的多肽的生物学功能。

本发明研究证实，上述短肽片段组合或替换后的多肽序列能够表现出较高的抑菌活性。根据多肽依据能力的高低，本发明进一步提高了SEQ ID NO:1-6所示序列的多肽，对于多种敏感、耐药的致病菌都表现出抑制活性，特别是SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的多肽，具有更加优异的抗菌活性及溶血性能。

基于本发明常规研究思路，上述抗菌肽的缀合物、融合蛋白及核酸分子对于相应的抗菌产品开发具有重要的应用价值。因此本发明还提供以下技术方案：

第二方面，提供一种缀合物，所述缀合物包括第一方面所述抗菌肽、其变体和修饰部分。

第三方面，提供一种融合蛋白，所述融合蛋白具有第一方面所述抗菌肽或其变体及其他多肽，所述其他多肽任选地通过接头连接至所述多肽或其变体的N端或C端。