[发明专利]表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白的重组腺病毒及其用途

权利要求书

1.结核分枝杆菌多阶段抗原融合基因，其特征在于，所述融合基因为Ag85B-ESAT-6和Rv2031c-Rv2626c，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示。

2.结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括Ag85B-ESAT-6和Rv2031c-Rv2626c，由权利要求1所述融合基因编码，所述Ag85B-ESAT-6和Rv2031c-Rv2626c的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3-4所示。

3.一种重组载体，其特征在于，所述的重组载体为包括权利要求1所述融合基因以及EF1启动子的pAdTrack-CMV载体，命名为pAdTrack-AE-EF1-R2，所述EF1启动子序列如SEQID NO.5所示。

4.如权利要求3所述重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

将Ag85B-ESAT-6融合基因插入pAdTrack-CMV载体KpnI和PvuI位点之间，将EF1启动子插入同一个pAdTrack-CMV载体的PvuI和AluI位点之间，将Rv2031c-Rv2626c融合基因插入同一个pAdTrack-CMV载体AluI和XhoI位点之间，后将pAdTrack-CMV载体转化至DH5α感受态细胞，经抗性筛选、平板挑菌和阳性克隆鉴定，得到重组载体。

5.一种表达权利要求1所述融合基因的重组腺病毒。

6.如权利要求5所述重组腺病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求3所述重组载体和骨架质粒pAdeasy-1共转染宿主细胞，培养并收获、纯化从所述细胞中释放的重组腺病毒。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为HEK293细胞。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将所述重组腺病毒进行扩大培养，并对培养产物进行纯化。

9.根据权利要求6所述重组腺病毒在制备用于预防结核分枝杆菌感染和预防结核病的疫苗中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述重组腺病毒被制备为滴鼻剂。