[发明专利]抗BCMA抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗BCMA抗体或其抗原结合片段、包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体、免疫细胞及药物。本发明还提供了一种抗BCMA抗体或其抗原结合片段的制备方法及应用。本发明制备的抗BCMA抗体或其抗原结合片段为全人源单链抗体，特异性更强，免疫原性更低，且可以特异性识别和结合BCMA阳性靶细胞，可为治疗与BCMA表达相关的疾病提供理论基础，从而应用于与BCMA表达相关的疾病的治疗与诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗BCMA抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用，所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段为靶向BCMA的高亲和力全人源单链抗体。

背景技术

BCMA(B cell maturation antigen，B细胞成熟抗原)是肿瘤坏死因子受体(TNF-receptor)超家族成员，又名CD269，它是由TNFRSF17基因编辑的一种B淋巴细胞成熟的标志蛋白。BCMA由184个氨基酸组成，其胞内区可与TRAF1，2，3相互作用并激活TRAF依赖的TNF-KB，JNK和P38 MAPK途径，胞外区富含半胱氨酸结构域，并能通过蛋白-蛋白的相互作用来传导细胞刺激信号。

BCMA主要表达于B淋巴细胞及浆细胞表面，在其他的组织细胞中几乎不表达。但是在恶性增殖的B淋巴细胞(如骨髓瘤细胞)中高度表达，同时它通过介导下游信号通路，在细胞的存活、增殖、转移和耐药中起关键性作用。这些特性使得它成为免疫治疗的一个靶点，特别是对于多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)的治疗。

多发性骨髓瘤是一种常见的血液系统恶性肿瘤，据统计，MM约占所有人类恶性肿瘤的1％，占血液系统恶性肿瘤的10％。其病理状态体现为骨髓内成熟浆细胞恶性增殖，导致骨骼破坏、骨髓衰竭和肾脏损伤。由于BCMA特异性地表达在成熟B细胞表面，且它的过表达和激活状态与MM明确相关，因此可将BCMA视为MM药物开发的理想靶标。

近年来，针对MM的发病机制研究获得了很大的进展，但现有的化疗和造血干细胞移植等方法仍存在无进展生存率低、缺乏供体、复发率高等问题。因此MM依然被认为是不可治愈的疾病。本申请利用全人源抗体库对BCMA蛋白胞外区进行特异性抗体序列筛选，并进行功能验证从而确定能够治疗MM的特异性抗体，达到治愈疾病的目的。

全人源噬菌体展示技术是将人类的抗体基因扩增出来，再融合至噬菌体衣壳蛋白中，经噬菌体表达后形成抗体库。噬菌体抗体库的抗体丰富度高，通过配体的特异性亲和力，可最终筛选出高亲和力的特异性抗体。这相对于传统的筛选技术，在时间周期、抗体类型、筛选范围、经济成本等方面有着突出的优势。通过噬菌体展示技术获得的抗体，不仅去除了鼠源抗体的免疫原性，而且免去了人源化操作，筛选过程简单高效，能在较短时间内获取亲和力较强的全人源抗体。

抗体作为靶向治疗药物在治疗肿瘤及自身免疫系统疾病中已被证明是一种可靠及有效的选择。而做为小分子抗体的代表，单链抗体(scFv)因其具有抗原亲和活性、分子量小、穿透力强、易清除及免疫原性低等优点，在疾病临床诊断、治疗、预防等方面具有重要作用和广阔的应用前景。但目前，应用传统方法制备的单链抗体或人源化抗体进行诊断或治疗，在一定程度上会引起人抗鼠抗体反应(HAMA)。因此，本申请通过噬菌体展示技术筛选制备的全人源单链抗体，可以很好地解决该问题，其免疫原性更低，更加安全。

发明内容

本发明的目的在于提供一种全人源的靶向BCMA的单链抗体，其包含重链可变区(VH)、柔性连接肽、轻链可变区(VL)。该单链抗体采用噬菌体展示技术筛选制备，经ELISA、免疫荧光分析验证，能够与BCMA抗原相结合，并可特异性结合或识别BCMA阳性靶细胞。