[发明专利]一种干涉型反射光谱RNA检测片

说明书

本发明属于核酸检测技术领域，提出了一种干涉型反射光谱RNA检测片，包括载玻片，载玻片上依次设置有第一铬层、第一金层、巯基修饰DNA层、DNA凝胶层、第一铬层、第二金层。其制备方法包括：将载玻片进行清洗，得到去污载玻片；在去污载玻片表面镀第一金层，得到载玻片Ⅰ；将载玻片Ⅰ清洗，清洗后在第一金层上涂布一层巯基修饰的DNA寡核苷酸链溶液Ⅵ，然后放入DNA凝胶溶液中浸泡，清洗后得到载玻片Ⅱ；在载玻片Ⅱ的表面再次镀第二金层，得到干涉型反射光谱RNA检测片，所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅵ中DNA寡核苷酸链Ⅵ的序列如SEQ ID NO：10所示。通过上述技术方案，解决了现有技术中miRNA检测手段操作复杂、成本高、检测周期长的问题。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，涉及一种干涉型反射光谱RNA检测片。

背景技术

MicroRNAs(miRNAs)是细胞内一类内源性非编码小分子单链RNA，一般由19-23个碱基组成。其生物发生是一个复杂的过程。miRNAs的交替表达与许多疾病有关。在将异常表达水平的miRNA与人类疾病、遗传疾病和免疫系统功能改变的发生和发展联系起来方面，人们已经进行了大量的观察。miRNA既可以作为致癌基因，也可以作为肿瘤抑制因子，强调其在人类癌症中的重要性。

miRNA的分析检测是对其生物功能研究、疾病诊断以及相关基因药物开发的关键技术，但由于其序列短、具有同源性、含量少、在细胞中表达丰度低，因此造成其检测十分困难。传统的miRNA分析检测技术主要包括：Northern杂交分析、实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)、克隆技术及基因芯片技术。这些技术在应用的过程中都有自己的优势和不足，可以根据实验的目的选择合适的检测手段。

RT-PCR需要的样品量少，灵敏度高，是检测miRNA最重要的方法，但由于miRNA片段短，将其直接转录为cDNA并作为PCR扩增的模板难于实现，并且价格较高。

Northern blotting技术是检测miRNA表达最主要的手段，所有克隆和生物信息学分析得来的miRNA都需要经过Northern blotting来验证和确认，是miRNA检测的金标准。该方法运用标记的DNA探针与硝酸纤维素膜上的miRNA进行互补杂交，通过显影检测目标条带。Northern blotting印记分析常采用同位素、荧光或纳米金标记DNA，此过程操作娴熟，可探知被检测miRNA的分子大小、凸显其丰度，且对仪器要求简单，因此一直被用于miRNA检测。但该存在法操作费时费力、耗样量大、高通量检测准确度低等缺点。

基因芯片也叫DNA芯片、DNA微阵列、寡核苷酸阵列，是指采用原位合成(或显微打印手段)，将大量的已知核苷酸或cDNA固化于支持物表面上，构成DNA微阵列，然后与扩增并标记后的样本进行杂交，通过检测其杂交信号来实现对样本的检测或医学诊断。是一种更快、更广泛、更有前途的研究miRNA表达的方法。芯片分析中，合理的探针设计、有效的miRNA标记尤其重要，决定着芯片的性能。芯片上要同时固定成千上万的miRNA探针，首先要解决的问题是如何确保所有的探针在相似的温度下都能进行杂交，由于miRNA自身长度的限制，所以不能通过简单的调节探针的长度而统一杂交温度。

因此，设计一种操作简单，成本低，检测周期短的检测手段具有重要意义。

发明内容

本发明提出一种干涉型反射光谱RNA检测片，解决了现有技术中miRNA检测手段操作复杂、成本高、检测周期长的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种干涉型反射光谱RNA检测片，包括载玻片，载玻片上依次设置有第一铬层、第一金层、巯基修饰DNA层、DNA凝胶层、第二铬层、第二金层；

所述巯基修饰DNA层采用的DNA寡核苷酸链Ⅵ序列如SEQ ID NO：10所示；