[发明专利]一种干涉型反射光谱RNA检测片

权利要求书

1.一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，包括载玻片，载玻片上依次设置有第一铬层、第一金层、巯基修饰DNA层、DNA凝胶层、第二铬层、第二金层；

所述巯基修饰DNA层采用的DNA寡核苷酸链Ⅵ序列如SEQ ID NO：10所示；

所述DNA凝胶为DNA凝胶溶液经过干燥得到，所述DNA凝胶溶液为DNA凝胶-1溶液、DNA凝胶-2溶液或DNA凝胶-3溶液；

所述DNA凝胶溶液的制备方法包括以下步骤：

A、准备DNA寡核苷酸链Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ；

所述DNA寡核苷酸链Ⅰ的序列如SEQ ID NO：1所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅱ的序列如SEQ ID NO：2所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅲ-1的序列如SEQ ID NO：3所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅲ-2的序列如SEQ ID NO：4所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅲ-3的序列如SEQ ID NO：5所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅳ-1的序列如SEQ ID NO：6所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅳ-2的序列如SEQ ID NO：7所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅳ-3的序列如SEQ ID NO：8所示；

所述DNA寡核苷酸链Ⅴ的序列如SEQ ID NO：9所示；

B、分别将步骤A的DNA寡核苷酸链Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ溶于超纯水中，制得DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ，将DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ和DNA寡核苷酸链溶液Ⅴ混合，在53.5～56.1℃下反应1～2h，反应结束后，加入DNA寡核苷酸链溶液Ⅱ，在67.5～70℃下反应3.5～4h，得到DNA凝胶主链溶液；

C、当制备DNA凝胶-1时，将步骤B的DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-1和DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-1混合，在52.7～57.5℃下反应1～2h，得到DNA凝胶支链-1溶液；将步骤B得到的DNA凝胶主链溶液和步骤C得到的DNA凝胶支链-1溶液混合得到混合液，将混合液进行退火，退火完成后的混合液在60～75rpm转速下旋转混合24h，得到DNA凝胶-1溶液；

当制备DNA凝胶-2时，将步骤B的DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-2和DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-2混合，在52.7～57.5℃下反应1～2h，得到DNA凝胶支链-2溶液；将步骤B得到的DNA凝胶主链溶液和步骤C得到的DNA凝胶支链-2溶液混合得到混合液，将混合液进行退火，退火完成后的混合液在60～75rpm转速下旋转混合24h，得到DNA凝胶-2溶液；

当制备DNA凝胶-3时，将步骤B的DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-3和DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-3混合，在52.7～57.5℃下反应1～2h，得到DNA凝胶支链-3溶液；将步骤B得到的DNA凝胶主链溶液和步骤C得到的DNA凝胶支链-3溶液混合得到混合液，将混合液进行退火，退火完成后的混合液在60～75rpm转速下旋转混合24h，得到DNA凝胶-3溶液。

2.根据权利要求1所述的一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ的浓度均为100μmol/L。

3.根据权利要求2所述的一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ的质量比为100：100：(40～90)：(40～90)：(40～90)：(40～90)：(40～90)：(40～90)：1；

所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-1与DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-1的质量比为1：1；

所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-2与DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-2的质量比为1：1；

所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-3与DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-3的质量比为1：1。

4.根据权利要求1所述的一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，所述步骤D中退火为将混合液在55～57℃下反应5min，然后在50～55℃下反应3min，最后降温至23～27℃，降温速度为1～2℃/min。