[发明专利]一种脐带来源的间充质干细胞培养方法

权利要求书

1.一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，包括干细胞的复苏、干细胞的传代、干细胞的回输或冻存，其中：

干细胞的复苏：在水浴锅中复苏冻存的干细胞，通过离心操作分离干细胞与冻存液，添加培养基培养干细胞；

干细胞的传代：将含有需要传代的细胞的培养液倒入收集瓶，添加盐水和胰酶消化液清洗培养瓶，添加培养液终止消化，培养液和消化液倒入离心瓶离心，在离心完成的细胞沉淀中添加培养液混悬，所得的细胞悬液中添加培养液传代；

干细胞的回输：将含有需要回输的细胞的培养液倒入收集瓶，添加盐水和胰酶消化液清洗培养瓶，添加培养液终止消化，培养液和消化液倒入离心瓶离心，取离心完成的沉淀添加盐水混匀，倒入回输血袋封口贴标签送至回输中心；

干细胞的冻存：将含有需要冻存的细胞的培养液倒入收集瓶，添加盐水和胰酶消化液清洗培养瓶，添加培养液终止消化，培养液和消化液倒入离心瓶离心，取离心完成的沉淀添加冻存液混匀，所得的细胞悬液加入冻存管，放置在程序降温盒内降温12h，转入液氮。

2.根据权利要求1所述的一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述干细胞的复苏的具体步骤包括：

从液氮罐中取出冻存的干细胞，

使用水浴锅溶解复苏冻存的干细胞，

复苏完成，转移干细胞至操作间的净化工作台，

使用移液管将冻存管中的干细胞转入离心管内，以1500转速度离心5min，

准备培养瓶，培养瓶中添加无血清培养基，

离心完成，弃上清液留细胞沉淀，

使用移液管在细胞沉淀中添加无血清培养基，吹打至混悬，

培养瓶中添加细胞悬液，

培养瓶上粘贴标签，放置于培养箱内培养。

3.根据权利要求2所述的一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述方法还包括：

所述无血清培养基为配置好的人间充质干细胞培养基，即在基础培养基中添加人间充质干细胞添加物，添加物成分包括白蛋白，胰岛素和转铁蛋白等营养成分。

4.根据权利要求1所述的一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述干细胞的传代的具体步骤包括：

转移需要传代的细胞至净化工作台，

准备培养瓶、收集瓶和离心瓶，

含有需要传代的细胞的培养液倒入收集瓶，

培养瓶中添加盐水清洗，清洗液倒入离心瓶，

添加胰酶消化液，晃动培养瓶，

培养瓶平放至充分消化，添加培养液终止消化，

消化液和培养液倒至离心管，

倒入盐水清洗培养瓶，清洗液倒入离心瓶，以500G速度离心5min，

弃上清液留细胞沉淀，添加培养液，

使用移液管混悬细胞液，混匀后平放至培养箱内，粘贴标签。

5.根据权利要求4所述的一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述方法还包括：

所述胰酶消化液由胰酶和盐水1:1调配而成。

6.根据权利要求1所述的一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述干细胞的回输的具体步骤包括：

准备离心管和收集瓶，细胞液倒入收集瓶，

培养瓶中添加盐水清洗，清洗液倒入离心瓶，

培养瓶中添加胰酶消化液消化2min至充分消化，添加培养液终止消化，

培养液和消化液的混合液倒入离心瓶，以500G速度离心5min，

弃上清液留细胞沉淀，添加盐水混匀，

使用注射器注入回输血袋，热合机封口，粘贴标签送回输中心，细胞液留样。

7.根据权利要求1所述的一种脐带来源的间充质干细胞培养方法，其特征在于，所述干细胞的冻存的具体步骤包括：

准备离心管和收集瓶，细胞液倒入收集瓶，

培养瓶中添加盐水清洗，清洗液倒入离心瓶，

培养瓶中添加胰酶消化液消化2min至充分消化，添加培养液终止消化，

培养液和消化液的混合液倒入离心瓶，以500G速度离心5min，

弃上清液留细胞沉淀，添加冻存液混匀，

添加细胞悬液至冻存管，塑封机封口，

冻存管放置在程序降温盒中，-20℃放置过夜转入液氮中，细胞悬液留样。