[发明专利]一种定量检测氟喹诺酮类药物的量子点微球免疫层析试纸条

权利要求书

1.一种定量检测氟喹诺酮类药物的量子点微球免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接粘贴在底板上，所述的结合垫上包被有氟喹诺酮单克隆抗体-标记物，所述的硝酸纤维素膜上设有包被氟喹诺酮-蛋白复合物的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线；

该试纸条的制备方法包括以下步骤：

（1）制备氟喹诺酮单克隆抗体-标记物，喷涂在所述的结合垫上，干燥备用；

（2）制备设有包被氟喹诺酮-蛋白复合物的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线的硝酸纤维素膜，干燥备用；

（3）制备样品垫：预先用含有0.5%-5% BSA，0.2%-2% Tween-20的缓冲液处理，干燥备用；

（4）将制备好的结合垫、硝酸纤维素膜、样品垫与吸水垫、底板组装成试纸；

所述的氟喹诺酮单克隆抗体-标记物为氟喹诺酮单克隆抗体-量子点微球标记物，制备所述氟喹诺酮单克隆抗体-量子点微球标记物的过程为：取量子点微球预先超声1～3min，用0.01-0.1 M pH 4～6的MES缓冲液调节浓度至0.05～1 mg/mL；加入终浓度为1～100 mM的EDC和NHS进行微球表面的羧基活化；加入终浓度为5～50 μg/mL的待标记抗体进行偶联；最终分散于含有0.01%-0.1% NaN₃和0.1%-1% BSA的0.01-0.1 M pH 6.0～9.0的PBS缓冲液中，分散后的体积为初始加入微球体积的1~10倍，于4℃保存备用；

所述的结合垫喷涂氟喹诺酮单克隆抗体-量子点微球标记物前需要先用含有0.5%-5%BSA，0.2%-2% Tween-20，5%-20% 蔗糖的PBS缓冲液浸泡处理，干燥备用；

所述量子点微球的粒径范围为50-200 nm；

所述的检测线上氟喹诺酮-蛋白复合物的用量为0.3-0.8 μg/cm；所述的质控线上羊抗鼠IgG的用量为0.5-1.5 μg/cm；稀释液为含3%-5%蔗糖的PBS缓冲液；

所述的氟喹诺酮-蛋白复合物是指通过化学偶联方法制备的具有免疫源性和反应源性的完全抗原；氟喹诺酮包括类属氟喹诺酮类抗生素的各类小分子物质；所述的蛋白为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白或钥孔血蓝蛋白；所述的偶联方法为重氮法、碳二亚胺法、戊二醛法、混合酸酐法或琥珀酸酐法；偶联比为1∶50～1∶150。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述底板的材料为硬质不吸水的材料；所述样品垫的材料为滤纸纤维；所述结合垫的材料为玻璃纤维或聚酯纤维；所述吸水垫的材料为吸水滤纸。

3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述底板的材料为PVC；所述样品垫的材料为玻璃纤维、棉纤维或聚脂纤维。

4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次以2-4 mm的间距交互层叠首尾粘贴在底板上。

5.一种利用权利要求1所述的试纸条定量检测氟喹诺酮类药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将加标样品溶液滴加到权利要求1所述试纸条的样品垫上，进行层析，然后利用荧光检测仪测得样品相应的荧光强度值，记为T值和C值；

（2）设置阴性对照，即样品中不含有氟喹诺酮类药物，利用荧光检测仪测得荧光强度T₀值和C₀值；

（3）以氟喹诺酮类药物浓度的对数为横坐标，(T/C)/(T₀/C₀)为纵坐标，绘制标准曲线；

（4）取待检样品溶液，加入试纸条层析10-15 min；

（5）将试纸条插入荧光检测仪的检测窗口，得到相应的荧光强度值，根据步骤（3）所得的标准曲线，即可计算出样本中氟喹诺酮类药物的含量。

6.权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的荧光检测仪为手持式荧光检测仪或其他荧光读取仪器，适合于现场快速定量检测氟喹诺酮类药物。