[发明专利]一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用

说明书

本发明涉及利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用，可有效解决利用可溶性淀粉及菌株HKS‑D‑3，成本低、品质好制备海藻糖浆的问题。一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株HKS‑D‑3，分类命名为芽孢杆菌（Bacillus sp），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.13052，保藏日期：2016年9月28日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述的菌株HKS‑D‑3在利用可溶性淀粉制备海藻糖浆中的应用。本发明制备过程无污染，产品质量好，方法简单，原料成本低，液体海藻糖浆可应用于微生物培养基中，可有效促进微生物的生长，菌丝生长，产品性能提高，质量好。

技术领域

本发明涉及微生物，特别是一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用。

背景技术

海藻糖广泛存在于自然界（如微生物、细菌、真菌、酵母菌、昆虫、无脊椎动物低等动植物体内），海藻糖是一个由两分子葡萄糖以α-1,1糖苷键连接的非还原性双糖，稳定的化学结构及特殊的物理性质，使其成为能够保持细胞活性、防止食品劣化、提升食品品质（王一雯，2019），在食品、医学、轻工业领域中广泛应用（黎高翔，2015），海藻糖广泛且独特的生物学功能，广泛受到关注，引发了世界性的研究开发热潮，但海藻糖生产成本高、价格昂贵限制了应用，海藻糖成本高主要集中在海藻糖的分离纯化造成的困难成本高。不同生物体内存在着5条海藻糖合成途径，是一种典型的应激代谢产物（巩涛，2016），其制备方法包括合成法、发酵法、提取法、酶转化法及基因工程法等（谢定，2013），目前在实验室和生产上制备海藻糖主要有三种方法：一是从酵母细胞中提取，但是提取工艺复杂，分离提取困难，成本高；二是采用微生物发酵生产，从发酵液中提取海藻糖，由于发酵液成分复杂造成提取困难；三是采用采用微生物发酵提取相关海藻糖合成酶，采用酶的转糖基化作用酶法合成海藻糖，酶法是至今各种海藻糖生产方法中最有前途的一种，它的出现为海藻糖的大规模工业化生产奠定了可靠基础。我国淀粉资源丰富，来源广泛，淀粉价格低廉，被认为是用来生产海藻糖的最佳原料，以淀粉为底物酶法生产海藻糖有重要意义，但至今未见有公开报导。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用，可有效解决利用可溶性淀粉及菌株HKS-D-3，成本低、品质好制备海藻糖浆的问题。

本发明解决的技术方案是，一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株HKS-D-3，分类命名为芽孢杆菌（Bacillus sp），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.13052，保藏日期：2016年9月28日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

所述的菌株HKS-D-3在利用可溶性淀粉制备海藻糖浆中的应用，其应用方法包括以下步骤：

（1）配制10%可溶性淀粉：将可溶性淀粉10g加入pH5.5-6.5磷酸缓冲液，沸水浴中，边搅拌边加热溶解至溶液呈透明状，冷却至室温，补充pH5.5-6.5磷酸缓冲液至100mL；

（2）制备粗酶液：将芽孢杆菌（Bacillus sp）HKS-D-3，以重量比0.3%接种于发酵培养基中，37℃、180r/min摇床震荡培养48h，4℃、6000r/min离心10～15min，弃去上清液，将获得的菌体泥用pH5.5-6.5磷酸缓冲液震荡洗涤2-3次，收集菌体沉淀，加入与发酵培养基等重量的pH5.5-6.5磷酸缓冲液，震荡使其悬浮，在冰浴中用超声波破壁处理，300W超声5s，间隔5s，再进下一次超声，总超声时间13min，于4℃、12000r/min离心10min，收集上清液，即为粗酶液；