[发明专利]一种人牙周膜干细胞无血清培养基

说明书

本发明提供了一种人牙周膜干细胞无血清培养基，涉及生物培养领域，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和生长因子添加物。不含动物源成分，可以完全实现无血清培养干细胞。采用本发明的无血清培养基培养添加了独家的Hydroxyapatite和氟化物，同时添加浓缩生长因子(CGF)和糖基化终端产物，可以显著提高人牙周膜干细胞的扩增效率，可在体外获得高数量、高纯度并且安全优质的牙周再生的种子细胞，同时可提高细胞存活率，维持干细胞的特性。本发明可解决人牙周膜干细胞扩增效率偏低，细胞数量不够的问题，且每批次的细胞数量、存活率及免疫表型更加稳定。

技术领域

本发明属于生物培养领域，具体涉及一种人牙周膜干细胞无血清培养基

背景技术

人原代牙周膜干细胞来源于人的正常牙组织，牙周病是口腔疾病中的常见病和多发病，常导致牙周支持组织破坏或缺损。目前，牙周支持组织重建主要依赖机械、药物或引导组织再生技术，随着分子生物学、组织工程学和干细胞技术的飞速发展，牙周组织再生工程技术成为牙周病治疗研究的热点，牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cell，PDLSC)是牙周组织再生工程的关键种子细胞之一。因此，关于牙周膜干细胞的研究逐渐成为热点。

骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells，BMSCs)是骨髓基质中的干细胞，是目前研究最充分、应用最广泛的干细胞。已有研究表明，牙周膜中存在着干细胞，表达间充质干细胞的标记物Stro-1，并具有多向分化潜能，称为牙周膜干细胞(periodontalligment stem cells，PDLSCs)，可作为牙周再生的种子细胞。干细胞在临床治疗中的应用越来越广泛，研究表明，其增殖与分化是影响治疗效果的关键因素。

目前临床上治疗牙周病的方法主要包括：传统的洁治术、刮治术、翻瓣术，以及牙周植骨术、引导组织再生术、结合使用生长因子等方法。虽然都能去除局部炎症刺激，控制病变发展，但均无法获得令人满意的牙周再生效果。组织工程技术的出现为实现真正意义上的牙周再生带来了希望。

目前，在干细胞的常规培养体系中均加入了一定比例的动物血清，比较常用的是胎牛血清或新生小牛血清。血清是由很多大小不同生物分子组成的极为复杂的混合物，它对细胞在体外培养时的主要作用是提供生长因子、激素、结合蛋白，并提供保护作用。但它可能会引入外源性基因，改变细胞的基因组稳定性，动物源成分，易致瘤风险，且涉及饲养层细胞等外源性细胞混杂而导致的干细胞移植安全问题，对以后可能的临床应用构成威胁，对用于规模化培养细胞增加了难度。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种人牙周膜干细胞无血清培养基，其不含动物源成分，可以完全实现无血清培养干细胞。

本发明提供了如下的技术方案：

一种人牙周膜干细胞无血清培养基，是由以下浓度的组分组成的，各浓度单位若无特别说明，均为mg/L：

余量为去离子水。

优选的，将所述原料物质根据权利要求1中的量和其各自溶解特性分类，加入水溶解后进行混合，调节pH值至7.0-7.4。

优选的，使用工业滤芯进行过滤，在氮气保护的条件下进行分装。

本发明的有益效果是：

本发明的人牙周膜干细胞无血清培养基，不含任何血清组分，且成分明确，避免了使用外源血清等成分不明物质带来的潜藏隐患，解决了应用的安全性问题。采用本发明的无血清培养基培养人牙周膜干细胞，细胞扩增倍数高、细胞形态更加均匀、饱满，表型稳定，干性维持的很好，符合相关指标要求。

具体实施方式