[发明专利]低ADCC/CDC功能性单抗及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201910605570.6 | 申请日： | 2019-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN110357962B | 公开（公告）日： | 2021-11-26 |
| 发明（设计）人： | 孙乐;李茂华;任文林 | 申请（专利权）人： | 北京天成新脉生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;A61P37/04;G01N33/577 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 陈征 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区经济技术*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | adcc cdc 功能 性单抗 及其 制备 方法 应用 | ||
【说明书】：
本发明提供了一种低ADCC/CDC功能性单抗及其制备方法与应用。本发明对PD‑L1、PD‑1、CTLA4、TNF‑α、PCSK9、NGF、CD47和C5等多靶点的抗体序列进行改造，在IgG1亚型抗体重链CDR3与CH2区之间插入一段柔性氨基酸序列，可降低ADCC/CDC功能，同时不显著增加多聚体形成。本发明的改造抗体和原始抗体针对相同位点，但抗体亚型或糖基化不同，稳定性显著提高或/和免疫原性显著降低，半衰期延长。改造抗体去除了ADCC/CDC功能，因此，经本发明的技术改造后的抗体能有效避免因ADCC/CDC功能造成的副反应，提高疗效，具有优异的临床应用价值，适于推广。
本申请要求于2018年7月6日提交中国专利局、申请号为201810738565.8、发明名称为“低ADCC/CDC功能性抗PD-L1全人源单抗及其应用”、2018年8月14日提交中国专利局、申请号为201810924249.X、发明名称为“针对人程序性死亡受体PD-1的IgG1亚型低ADCC/CDC功能性抗体”以及于2019年5月7日提交中国专利局、申请号为201910376852.3、发明名称为“针对人CTLA4的IgG1亚型低ADCC/CDC功能性抗体”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及治疗用抗体的制备及应用，主要涉及低ADCC/CDC功能性单抗的应用，以及降低抗体的ADCC/CDC等功能的方法。
背景技术
抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity，ADCC)是指表达IgG Fc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等，通过与已结合在靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合，而杀伤这些靶细胞的作用。IgG抗体可介导这些细胞发挥ADCC作用，其中NK细胞是能发挥ADCC作用的主要细胞。在抗体介导的ADCC作用的发生过程中，抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，故抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，NK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。
CDC指补体系统被激活后，在靶细胞表面形成MAC，导致靶细胞溶解，这种效应称为补体依赖的细胞毒作用。补体能导致多种细菌和其他病原生物细胞的溶解，是机体抵抗病原生物感染的重要防御机制。尤其是对防止革兰阴性菌的感染有重要作用。在某些病例情况下，补体系统可引起机体组织或细胞损伤，参与超敏反应和自身免疫病的致病过程。
抗体药的应用并不局限于传染病和肿瘤，为了避免抗体结合靶蛋白后诱导不利的ADCC和CDC功能，目前采取的主要方法有对抗体重链进行了糖基化位点氨基酸N(297)突变成A的去糖基化突变或将抗体重链改为IgG2/4亚型。但是抗体重链去糖基化，导致了产品中多聚体含量过高，药物免疫原性显著增强，病人多次给药后产生抗药抗体(ADA)发生率高。IgG2亚型的抗体仍能够通过与FcγRIIa的结合引发单核细胞介导的ADCC与巨噬细胞介导的ADCP。此外，IgG2的铰链区上游存在额外的Cys残基，因此会形成二硫键异构体影响IgG2分子的空间构象与功能。而将抗体重链改为IgG4亚型，IgG4亚型的抗体药重链在血液中会自动发生和其他人IgG4重链交换，形成半分子以及双特异的功能单价的抗体。同时，IgG2/4亚型抗体半衰期比IgG1亚型显著缩短。
PD-1主要在激活的T细胞和B细胞中表达，功能是抑制免疫细胞的激活，这是免疫系统的一种正常的自稳机制，因为过度的T/B细胞激活会引起自身免疫病，所以PD-1是我们人体的一道护身符。但是，肿瘤微环境会诱导浸润的T细胞高表达PD-1分子，肿瘤细胞会高表达PD-1的配体PD-L1和PD-L2，导致肿瘤微环境中PD-1通路持续激活，T细胞功能被抑制，无法杀伤肿瘤细胞。
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- PD-L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒-202111485981.X
- 蓝嘉盈;徐震宇;林晓东 - 广州兆瑞医学生物科技有限公司
- 2021-12-07 - 2023-10-27 - C07K16/28
- 本申请涉及单克隆抗体领域，更具体地说，它涉及PPD‑L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒，重链可变区包括如下互补决定区：CDRH1：DIYMH；CDRH2：RIGPANGDIKYDPKFQG；CDRH3：YGSYFAMDY；轻链可变区包括如下互补决定区：CDRL1：RASGNIHNYLA；CDRL2：NAKTLAD；CDRL3：QHFWSTPYT。本申请中的抗体对PD‑L1抗原具有良好的特异性和结合性，具有广阔的运用前景。
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