[发明专利]促转导素-D－改良的基因转移增强剂在审
| 申请号： | 201880070990.2 | 申请日： | 2018-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN111491944A | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | W-G·福斯曼;R·里克特 | 申请（专利权）人： | 法瑞斯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/005 | 分类号： | C07K14/005;C12N15/86 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;徐迅 |
| 地址： | 德国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转导 改良 基因 转移 增强 | ||
【说明书】：
本发明涉及具有序列Z1‑Gln‑Ala‑Lys‑Ile‑Lys‑Gln‑Ile‑Ile‑Asn‑Met‑Trp‑Gln‑Z2的多肽。该多肽用于逆转录病毒转染/转导。
本申请涉及改进的基因转移增强剂(即促转导素D(PTD-D)，其是对转导增强剂PTD-A和PTD-B的改进)，并且涉及其多肽，并且涉及其N末端保护的多肽，并且涉及包含所述多肽的药物，并且涉及所述多肽在基因治疗中的应用，并且涉及用于增强基因工程病毒构建体对细胞的感染的方法以及所述多肽用于转染或转导扩增的用途。
自克隆第一个人类基因并重组生产以来，用于改变特定细胞功能的遗传物质的引入已成为生物医学基础和应用研究中必不可少的工具。基因导入方法不断进步，促使基因转移的优化。
对转导增强剂的开发研究使得促转导素-A被发现，这是一种来自HIV病毒包膜蛋白的肽。令人惊讶的是，它适合于以前所未有的程度提高基因材料进入核内的慢病毒转导(Yolamanova等人，自然·纳米技术)。因此，可以证明，例如，与金标准“重组人纤维蛋白片段(retroectin)”相比，以不同浓度(1-100μg/ml)的促转导素-A(同义词：EF-C)预温育的HIV对报告细胞的感染率增加了十的几次方倍。作为作用机理，假定EF-C形成能够结合和浓缩病毒并因此放大病毒进入细胞的纤维结构。除感染病毒颗粒外，EF-C还可以在基因治疗中广泛应用的多种人类细胞类型(T细胞、胶质细胞、成纤维细胞、造血干细胞)中高效增强慢病毒和逆转录病毒颗粒的转导(Jan Münch等人，自然·纳米技术，第8卷，第2期，第130-136页)。EP 2452947A1也涉及促转导素A。
半胱氨酸属于极性中性氨基酸。此外，由于其独特的功能性硫醇基团，因此半胱氨酸是一种从未被考虑过修饰或甚至被另一种氨基酸，尤其是来自另一组氨基酸的取代的氨基酸。像Cys一样，Tyr、Asp、Ser、Gly、Gln、Thr是一部分极性但中性的氨基酸。但是，本领域技术人员会回避用其他组的氨基酸取代，因为这种取代对通过交换修饰的肽的二级结构的影响是难以预见的。因此，本领域技术人员不会考虑用非极性疏水性氨基酸组中的氨基酸取代促转导素的Cys。
然而，现在令人惊讶地发现，促转导素中的氨基酸Cys可以被丙氨酸取代，而不会导致修饰的多肽作为转导增强剂的有效性发生显著变化。
根据本发明，提供了一种修饰的促转导素，其一方面具有与PTD-A作为转导增强剂相当的功效，还具有更高的储存稳定性，并且确保了在其作为转导增强剂的应用中的操作更简单，这是GMP生产中的巨大优势。
本发明的多肽与如下序列具有至少80％或90％的序列同一性，尤其是95％的序列同一性
Z1-Gln-Ala-Lys-Ile-Lys-Gln-Ile-Ile-Asn-Met-Trp-Gln-Z2。
Z1彼此独立地是多肽的N末端，或彼此独立地是氨基酸Leu或Ser，或以下肽：
Ser-Asn、Ser-Asn-Asn、Ser-Asn-Asn-Ile、Ser-Asn-Asn-Ile-Thr、Thr-Leu、Ile-Thr-Leu、Asn-Ile-Thr-Leu、Asn-Asn-Ile-Thr-Leu、或Ser-Asn-Asn-Ile-Thr-Leu，
Z2彼此独立地为多肽的C末端，或彼此独立地为氨基酸Gly或Glu或以下肽：
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- 本发明公开了一种新型复合型层析介质，其具有独特的核壳结构，专为生物大分子的分离纯化而设计。其以高聚物微球为基质，粒径均一，粒径大小可以调节并精确控制，具有良好的物理化学稳定性。其表面经特殊处理，具有更好的亲水性，最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。并通过专有的表面修饰专利技术，通过精确控制两步关键的化学反应来建立壳层、核层的表面化学。两层的表面化学官能团可以选择和官能团密度可以调节、精确控制，并确保了壳层、核层的官能团的高密度和均一性，壳层、核层的厚度可以调节且均一性良好。该核壳结构复合模式层析介质可广泛适用于蛋白、抗体、病毒、病毒载体、疫苗、DNA、RNA、质粒等生物大分子的分离和纯化。
- 猪圆环病毒3型Cap重组蛋白、其编码基因及在ELISA抗体检测中的应用-202111422353.7
- 白娟;李勇;姜辰龙;姜平;周而璇 - 南京农业大学
- 2019-01-18 - 2023-04-25 - C07K14/005
- 本发明公开了一种猪圆环病毒3型Cap重组蛋白、其编码基因及在ELISA抗体检测中的应用，本发明采用PCR方法将PCV3 Cap基因中表达第60‑120aa的基因片段删除，得到了PCV3 Cap重组蛋白的编码基因，将该编码基因克隆至pET32a，再转化至Rosseta感受态细胞，经IPTG诱导表达，可以得到PCV3 Cap重组蛋白。该蛋白呈可溶性表达，可与His标签抗体结合，采用亲和层析方法便于纯化。采用该重组蛋白对猪进行免疫，可以得到多克隆抗体，该多克隆抗体效价高，与PCV3有相似的抗原性。以该重组蛋白包被酶标板，对PCV3进行间接ELISA抗体检测，具有敏感性、特异性和重复性好等优势。
- 用于眼部基因疗法的经修饰的腺相关病毒衣壳蛋白及其使用方法-202180011349.3
- A·弗雷德里克;X·金;L·刘;C·奥瑞奥丹;J·沙利文 - 建新公司
- 2021-01-29 - 2023-04-18 - C07K14/005
- 本文提供了经修饰的腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白、包含所述衣壳蛋白的组合物(例如，rAAV)、和编码所述衣壳蛋白的核酸。本文提供的AAV衣壳赋予视网膜细胞嗜性和/或角膜细胞嗜性，并且介导在临床相关的眼部细胞类型诸如感光细胞和/或角膜内皮细胞中改善的转导效率。还提供了编码所述衣壳蛋白的核酸以及包含所述衣壳蛋白的AAV颗粒。
- 专利分类
