[发明专利]改进修饰的/突变的细菌萤光素酶在审

专利信息
申请号: 201880068793.7 申请日: 2018-10-25
公开(公告)号: CN111315875A 公开(公告)日: 2020-06-19
发明(设计)人: S.L.苏科 申请(专利权)人: 豪夫迈·罗氏有限公司
主分类号: C12N9/02 分类号: C12N9/02;C12Q1/66
代理公司: 中国专利代理(香港)有限公司 72001 代理人: 甘霖;李唐
地址: 瑞士*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 改进 修饰 突变 细菌 萤光
【权利要求书】:

1.与对照细菌萤光素酶相比具有改进的活性的修饰的细菌萤光素酶,其中所述修饰的细菌萤光素酶的LuxA亚基包含与所述对照细菌萤光素酶的LuxA亚基具有至少80%同一性的氨基酸序列,其中所述对照细菌萤光素酶的LuxA亚基具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

2.权利要求1的修饰的细菌萤光素酶,其中所述氨基酸序列在对应于SEQ ID NO:2的位置11、22、102、130、166、168、170、172、218、224、236、261、264、286、308、309或334的位置处包含至少一个氨基酸取代。

3.权利要求1至2中任一项的修饰的细菌萤光素酶,其中改进的活性是与所述对照细菌萤光素酶相比光产生的增加和/或更慢的信号衰减。

4.权利要求1至3中任一项的修饰的细菌萤光素酶,其中:

(a) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置170的氨基酸是R、W或K;

(b) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置102的氨基酸是K;

(c) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置264的氨基酸是D;

(d) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置286的氨基酸是D;

(e) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置22的氨基酸是H;或

(f) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置166的氨基酸是Y。

5.权利要求4的修饰的细菌萤光素酶,其中所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ IDNO:2的位置170的氨基酸是R。

6.权利要求1至5中任一项的修饰的细菌萤光素酶,其中:

(a) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置168的氨基酸是R,且所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置309的氨基酸是T;

(b) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置218的氨基酸是V,且所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置224的氨基酸是R;

(c) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置172的氨基酸是I,且所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置236的氨基酸是R;

(d) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置286的氨基酸是D,且所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置308的氨基酸是D;

(e) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置11的氨基酸是L,且所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置261的氨基酸是D;或

(f) 所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置130的氨基酸是I,且所述修饰的细菌萤光素酶对应于SEQ ID NO:2的位置224的氨基酸是R。

7.权利要求1至6中任一项的修饰的细菌萤光素酶,其中所述氨基酸序列与所述对照细菌萤光素酶的LuxA亚基具有至少90%同一性。

8.重组核酸,其编码权利要求1至7中任一项的修饰的细菌萤光素酶。

9.权利要求8的重组核酸,其中编码所述LuxA亚基的核酸序列与SEQ ID NO:1和/或SEQID NO:1的核苷酸1至1065具有至少80%同一性。

10.权利要求9的重组核酸,其中编码所述LuxA亚基的核酸序列与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:1的核苷酸1至1065具有至少90%同一性。

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