[发明专利]一种利用淀粉通过共培养生产平菇-裂壶藻复合物的方法

说明书

本发明涉及的是一种利用淀粉通过共培养生产平菇‑裂壶藻复合物的方法，包括如下步骤：一、用含有水溶性淀粉的培养基培养平菇菌丝；二、培养裂壶藻种子细胞；三、将平菇菌丝与裂壶藻种子细胞共培养，平菇菌丝在含有淀粉、谷氨酸钠、酵母粉和海水晶等营养物的培养基中先培养5天后，接入的裂壶藻种子细胞，再共培养4‑6天，获得的平菇‑裂壶藻复合物即共培养物的油脂含量远高于同等条件下独立培养平菇菌丝或裂壶藻的油脂含量。油脂对淀粉的得率比用淀粉独立培养裂壶藻提高8倍，共培养物生物量对淀粉的得率达34%。本发明克服了用淀粉培养裂壶藻油脂产量低的缺陷，为工业化利用淀粉经济生产平菇‑裂壶藻复合物及其生物油脂奠定了基础。

一、技术领域

本发明涉及的是生物技术领域中利用微生物共培养生产复合细胞产物及生物油脂技术，具体涉及一种利用淀粉通过共培养生产平菇-裂壶藻复合物的方法。

二、背景技术

平菇（Pleurotus ostreatus）属于担子菌门下伞菌目侧耳科，容易培养。由于平菇菌丝能够分泌淀粉酶，将淀粉分解成糖，所以其在淀粉培养基中生长良好。平菇营养丰富并含有平菇多糖，常用作食品或饲料，但含油脂量较低（占干重的2%-3%）。裂壶藻（Schizochytrium sp.），又称裂殖壶菌，属于真菌门、网粘菌纲、破囊壶菌目、破囊壶菌科，是一种海洋微生物。裂壶藻含油脂量高，现在经常被用来生产单细胞油脂（Single celloil，SCO），尤其是不饱和脂肪酸（兹斐·科恩，考林·腊特列杰著，单细胞油脂：微生物和藻类来源的油脂，2015）。然而裂壶藻有一个弱点，就是难以利用淀粉生长和积累油脂。这使得利用淀粉培养裂壶藻生产生物油脂效果很差。平菇与海洋微生物共培养的技术工艺尚未见报道。裂壶藻与其它细胞共培养生产复合物的技术工艺也未能检索到。

三、发明内容

本发明的目的是提供了一种利用淀粉通过共培养生产平菇-裂壶藻复合物的方法，这种利用淀粉通过共培养生产平菇-裂壶藻复合物的方法用于解决裂壶藻独立培养在淀粉为碳源的培养基中产油脂量低的问题，同时获得一种新的可作为食品或饲料添加剂的高油脂含量的平菇-裂壶藻共培养物。

为了实现上述目的，本发明采用的具体技术方案如下：这种利用淀粉通过共培养生产平菇-裂壶藻复合物的方法：

一、用含有水溶性淀粉的培养基培养平菇菌丝：将平菇斜面菌种接于固体转液体培养的培养基中，振荡培养12天后，按10%接种量，同样条件下扩繁一次；然后再按10%接种量置于含水溶性淀粉和适于裂壶藻生长的液体培养基中，水溶性淀粉质量与液体培养基体积比为2-4%，在22-28℃、150-200rpm振荡条件下进行诱导驯化培养，10-15天后，得到平菇菌丝，作为种子细胞使用；

二、培养裂壶藻种子细胞：将裂壶藻斜面藻种接于种子活化液体培养基中，在振荡条件下进行培养1-2天后，再按10%接种量，同样条件下扩繁一次，得到裂壶藻种子细胞；

三、将平菇菌丝与裂壶藻种子细胞在摇瓶中共培养：先接种平菇菌丝于共培养基中，共培养基是由2-4%水溶性淀粉、0.6%谷氨酸钠、0.3%酵母粉、0.1%KH₂PO₄和海水晶构成的液体培养基，共培养基的PH为6.0，接种量为平菇菌丝鲜重占共培养基体积的2-4%，平菇菌丝选择细小的，每250ml摇瓶装90ml培养基，在22-28℃、180rpm振荡培养5天后，再将裂壶藻种子细胞接种于所述共培养基中，裂壶藻种子细胞接种量为5%-10%，继续培养4-6天，得到平菇-裂壶藻复合物，取样测定平菇-裂壶藻复合物油脂含量和生物量。

一种利用淀粉通过共培养生产平菇-裂壶藻复合物的方法：