[发明专利]A型流感病毒核蛋白S69位突变序列及其突变体与应用

说明书

本发明公开了A型流感病毒核蛋白S69位突变序列及其突变体与应用。本发明提供了流感病毒核蛋白突变体，为将流感病毒核蛋白氨基酸序列第69位丝氨酸S突变为谷氨酸E或丙氨酸A，且其他氨基酸残基不变得到的蛋白。本发明涉及NP S69E或S69A对病毒在细胞和小鼠上的致病力、病毒聚合酶活性、病毒RNA的转录和复制、NP自聚化、NP与病毒聚合酶蛋白相互作用、NP与RNA结合、NP细胞内定位等的影响。本发明涉及提供流感疫苗候选毒株。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种A型流感病毒核蛋白S69位突变序列及其突变体与应用。

背景技术

A型流感病毒(IAV)是引起流感疫情的主要病原，有时会引发严重的呼吸系统疾病，由于宿主对新变异的病毒还没有生成免疫力，病毒流行往往伴随着人或动物显著的发病率及死亡率。A型流感病毒为囊膜病毒，属于正粘病毒科，基因组由8股负链RNA节段组成。病毒核糖核蛋白(vRNP)复合物是病毒的核心成分，主要由三种聚合酶蛋白(PB1、PB2、PA)、核蛋白(NP)和病毒RNA(vRNA)组成，在流感病毒转录和复制过程中发挥着重要作用。流感病毒高度变异性的特点使得当前的流感疫苗无法有效的实现预防保护作用，因此研究更适合的通用疫苗十分重要。

NP由第5条RNA节段编码，是病毒粒子中丰度较高的蛋白。在流感病毒感染期间，NP的亚细胞定位、寡聚化、与vRNP其它组分相互作用等是调节病毒聚合酶活性和病毒复制能力的重要因素。NP上存在着一个尾环结构，将这个环插入到相邻NP分子主体的结合槽内部，介导NP的寡聚化，参与vRNP复合物的形成。NP可以与病毒聚合酶蛋白PB1、PB2相互作用，但不与PA结合。而且NP具有较高的RNA结合活性，结合RNA无序列特异性。NP能够与宿主细胞中的核输入蛋白(importin-α)相互作用，介导NP自身入核，进而促进vRNP入核，也在vRNP出核过程中起一定的作用。

病毒感染真核细胞过程中，磷酸化修饰经常发生在丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸上，磷酸化是将ATP上的磷酸基团转移到受体蛋白上的过程。磷酸化和去磷酸化通过调控病毒蛋白功能，在病毒复制周期中发挥重要作用。有的磷酸化能够激活蛋白活性，相应去磷酸化抑制蛋白活性，或者反过来也有可能去磷酸化“开启”蛋白活性，磷酸化“关闭”蛋白活性。

发明内容

本发明的一个目的是提供流感病毒核蛋白突变体。

本发明提供的流感病毒核蛋白突变体，为将流感病毒核蛋白氨基酸序列第69位丝氨酸S突变为谷氨酸E或丙氨酸A，且其他氨基酸残基不变得到的蛋白。

上述流感病毒核蛋白突变体中，所述流感病毒核蛋白源于A型流感病毒。

上述突变体中，所述流感病毒核蛋白的氨基酸序列为序列表中序列1。

编码上述的突变体的核苷酸也是本发明保护的范围。

含有上述核苷酸的重组载体也是本发明保护的范围。

上述突变体或上述核苷酸或上述的重组载体在如下1)-6)中任一所述中的应用也是本发明保护的范围：所述突变体为将流感病毒核蛋白氨基酸序列第69位丝氨酸S突变为丙氨酸E，且其他氨基酸残基不变得到的蛋白：

1)制备病毒致病力降低的流感病毒；

2)制备病毒聚合酶活性降低的流感病毒；

3)制备病毒RNA转录降低和/或病毒RNA复制降低的流感病毒；

4)制备NP与PB2结合减弱的流感病毒；

5)制备NP入核减弱的流感病毒；

6)制备抑制NP与importin-α3相互作用的流感病毒。