[发明专利]一种猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于兽用疫苗技术领域，具体涉及一种猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法。所述猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗包括猪多杀性巴氏杆菌荚膜多糖和蛋白类载体，两者经纳米微球连接而成，其中猪巴氏杆菌荚膜多糖、蛋白类载体和纳米微球的重量比为(1.5～2.5)：(0.5～1)：1。所述猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗的制备方法包括以下步骤：多糖‑纳米微球偶联体的制备、多糖‑纳米微球偶联体的改性以及猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗的制备。本发明猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗采用荚膜多糖和破伤风类毒素相结合，提高了疫苗的免疫原性，制备的疫苗免疫原性强、安全无毒副作用并且接种效果好。

技术领域

本发明属于兽用疫苗技术领域，具体涉及一种猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法。

背景技术

多杀性巴氏杆菌是一种革兰氏阴性短杆菌，能够感染家畜、家禽和野禽等多种动物，具体表现为禽类的禽霍乱、猪肺疫、牛和兔等动物的出血性败血症。其中，猪是巴氏杆菌最常见的自然宿主，其会引起猪体的肺炎、败血症甚至混合感染，导致猪群的高发病率和高死亡率。我国传统上所说的“猪肺疫”是由猪多杀性巴氏杆菌引起的一种急性传染病，俗称“锁喉风”，其中急性症状表现为败血症变化、咽喉部肿胀和高度呼吸困难，慢性症状表现为慢性肺炎。传统的对于猪多杀性巴氏杆菌感染的治疗主要采用药物治疗如抗生素等，但近年来随着抗生素的广泛使用，多杀性巴氏杆菌的耐药性越来越强，而且还会产生一定的副作用，因此多杀性巴氏杆菌引起的疾病单纯的靠药物预防已经变得越来越困难。

中国专利文献CN 107569681 A公开了一种牛多杀性巴氏杆菌病二价灭活疫苗及其制备方法，该疫苗由抗原和疫苗佐剂组成，其中的抗原为牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型Pm-TJ株和牛多杀性巴氏杆菌荚膜B型C45-2株，该种灭活疫苗虽然安全可靠，但在使用上具有一定的局限性，能否应用于其他畜类尚未可知。目前，除了药物治疗外，主要采用灭活疫苗和活菌疫苗来预防猪多杀性巴氏杆菌病，但灭活疫苗只对同源菌株的感染具有保护作用，而活菌疫苗对同源菌株和异源菌株的感染具有一定的交叉保护作用，但易出现毒力返强的现象。

荚膜是存在于多杀性巴氏杆菌细胞壁外的一层粘液性物质，可保护细菌免受抑菌或杀菌物质的侵害以及宿主吞噬细胞的吞噬，同时还有助于细菌黏附于宿主细胞表面以诱发感染，是细菌得以生存的重要表面结构。研究表明，多杀性巴氏杆菌的荚膜主要成分是多糖，是细菌重要的保护性抗原和毒力因子，同时也是细菌结构变化最少的表面抗原，具有较好的免疫原性，因此是最适宜做疫苗的靶抗原之一。荚膜多糖疫苗与传统疫苗相比，其成分单一，不存在易引起免疫副反应的物质，使得该类疫苗更为安全、有效，已成为应用最多的疫苗之一。

近年来，已经出现了将荚膜多糖应用于制备多杀性巴氏杆菌疫苗的实例。例如，中国专利文献CN 104163858 A公开了一种多杀性巴氏杆菌无细胞抗原，所述抗原来自灭活的多杀性巴氏杆菌培养物的上清液，所述的上清液含有多糖和蛋白，该疫苗具有注射部位局部副反应小及对动物的生长影响作用小，但是其由于分子量过小导致免疫原性效果不佳。中国专利文献CN 106729696 A公开了一种罗非鱼源无乳链球菌荚膜多糖疫苗的制备方法及其应用，该疫苗由鱼源无乳链球菌荚膜多糖制备所得，并与破伤风类毒素载体相结合，获得的疫苗特异性强并具有免疫保护力。

基于目前的多杀性巴氏杆菌疫苗存在着免疫原性低、使用上存在着局限性、需要进行多次接种以及可能有一些残留的毒力等问题，因此急需为人们提供一种新型的免疫原性强、安全无副作用并且接种效果好的猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种猪巴氏杆菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法，该多糖蛋白偶联疫苗采用荚膜多糖和破伤风类毒素蛋白载体相结合，提高了疫苗的免疫原性，制备的疫苗免疫原性强、安全无毒副作用并且接种效果好。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：