[发明专利]牛lncRNA-133a及在牛骨骼肌卫星细胞增殖分化调控中的应用和验证方法

说明书

本发明涉及一种牛lncRNA‑133a序列及在牛骨骼肌卫星细胞增殖分化调控中的应用和验证方法。本发明提供了一种牛肌肉发育相关的长链非编码RNAlncRNA‑133a的序列，本发明首次发现了lncRNA‑133a具有促进牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的功能，能够将lncRNA‑133a应用在牛骨骼肌卫星细胞的增殖分化调控中。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其是一种牛lncRNA-133a序列及在牛骨骼肌卫星细胞增殖分化调控中的应用和验证方法。

背景技术

骨骼肌作为动物躯体最重要的组织之一，占重比高达40％。肌细胞作为骨骼肌的基本形成单位，它的分化发育直接影响到骨骼肌的发育形成。肌细胞的分化和生长发育过程是内在遗传、表观遗传和外在各种信号互作的结果，受到机体肌肉发育调节因子和调控通路的多层次精细调节。LncRNAs作为一种长链非编码RNA可以参与细胞的生长发育等许多生命过程。随着人们对LncRNAs研究的不断深入，研究者已经发现许多LncRNAs可以参与肌细胞的增殖和分化过程。尽管LncRNAs参与肌肉发育的研究已有很多，但是多集中于模式动物小鼠的研究上。近年来，随着生物检测技术及生物信息学分析技术的发展，通过对牛骨骼肌肌肉组织进行高通量测序分析已经获得了大量的与肌肉发育潜在相关的LncRNAs。针对这些获得的肌肉发育潜在相关的LncRNAs，研究者也开展了一些功能研究，并且证实了一些LncRNA，如：LncRNA HZ-5、LncRNA H19、lncMD等，确实参与了对牛骨骼肌肌细胞分化发育的调节。但相较小鼠C2C12成肌细胞生长发育相关LncRNA的报道，参与调节牛骨骼肌细胞生长发育的LncRNAs的相关报道仍然较少，测序获得的与牛肌肉发育相关的海量LncRNAs，还需要研究者不断挖掘和证实它们的功能。

骨骼肌卫星细胞的成肌分化和增殖可作为体外模拟骨骼肌生长发育的模型，LncRNAs作为一类参与肌肉发育的调控因子，可以利用骨骼肌卫星细胞的模型，通过过表达或干扰LncRNAs后，研究其对肌肉发育的调控作用。lncRNA-133a是新发现的一个与肌肉发育相关的LncRNA，但其在牛骨骼肌卫星细胞成肌分化和增殖过程中的作用尚不清楚。

肉牛作为一种重要的家畜动物，其产肉量和肉品质一直是人们关注的热点。通过研究lncRNA-133a在牛骨骼肌卫星细胞成肌分化和增殖中的作用，可以积累更多的关于肉牛骨骼肌生长发育机理的资料，为提高肉牛产肉量和肉品质的研究提供科学依据。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种牛lncRNA-133a序列及在牛骨骼肌卫星细胞增殖分化调控中的应用和验证方法，本发明首次发现了lncRNA-133a具有促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化和促进牛骨骼肌卫星细胞增殖的功能。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种牛lncRNA-133a，所述牛lncRNA-133a的核苷酸序列为SEQ1。

而且，所述牛lncRNA-133a具有促进牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的功能。

如上所述的牛lncRNA-133a在牛骨骼肌卫星细胞的增殖分化调控中的应用。

而且，所述应用为在促进牛骨骼肌卫星细胞成肌分化中的应用。

而且，所述应用为在促进牛骨骼肌卫星细胞增殖中的应用。

如上所述的牛lncRNA-133a在牛骨骼肌卫星细胞的增殖分化调控中的应用的检测方法，步骤如下：

⑴在lncRNA-133a骨骼肌卫星细胞中转染lncRNA-133a真核细胞表达质粒，实现细胞内lncRNA-133a的过表达，设置对照组，诱导牛骨骼肌卫星细胞向成肌方向分化2天；收集细胞，检测对照组及实验组的骨骼肌卫星细胞分化标志基因MHC、MyoD和MyoG表达水平；