[发明专利]鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼的方法及其用途

说明书

本发明公开了一种鉴别岱衢族大黄鱼和闽‑粤东族大黄鱼的方法，鉴定引物为：J1：F1:5’‑GGCATTTACACACATGGAC‑3’;R1:5’‑GGGATCACAACAGAGCGG‑3’；J2：F2:5’‑CATTCCCTTCCGCGCTAGT‑3’;R2:5’‑GGCTGCAAGTTCCTGAC‑3’。有益效果为：充分利用两种地理种群大黄鱼基因的高频差异位点，同时兼顾引物的二级结构，利用引入错配碱基的方法，设计出的本发明的鉴定引物。设计得到的鉴定引物特异性强，PCR扩增效率高，相较于现有技术，鉴别时间更短，准确率更高。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，尤其是涉及一种鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼的方法及其用途。

背景技术

大黄鱼(Pseudosciaena crocea (Richardso n))，隶属鲈形目(Perciformes)鲈亚目(Percoidei)石首鱼科(Sciaenidae)黄鱼属(Pseudosciaena)， 属于亚热带集群性近海鱼类， 分布于黄海中部以南至琼州海峡以东的中国大陆近海及朝鲜西海岸， 雷州半岛以西也偶有发现。根据大黄鱼的外部形态和生态地理学特征，我国沿海大黄鱼分为3个地理种群。其中，岱衢族，分布于黄海南部至东海中部， 包括吕泗洋、岱衢洋、猫头洋、洞头洋至福建嵛山岛附近；闽-粤东族， 主要分布在东海南部、台湾海峡和南海北部(嵛山岛以南至珠江口)。

因岱衢族大黄鱼在体色、体型、营养价值和风味方面等方面的优势, 在市场上价格要比闽-粤东族大黄鱼高; 在养殖方面, 其生长速度、成活率、发病率、饵料系数和抗寒能力等方面也强于福建的闽-粤东族大黄鱼。而在宁波、舟山地区养殖的大黄鱼绝大部分为闽-粤东族大黄鱼, 其在外观上与岱衢族大黄鱼很相似, 采用传统的性状观察, 主观性强, 也很难进行有效区分。

发明内容

本发明的目的之一在于一种鉴别时间短，可有效避免假阴性结果，准确率高的鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼的方法。

本发明的目的之二在于将鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼的方法用于快速准确地鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼，克服了形态特征鉴定的缺陷，解决了种质混杂的问题，为种质保护、合理利用以及种质的生物多样性研究提供了技术支撑。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼的方法，鉴定引物为：

J1：F1:5’- GGCATTTACACACATGGAC-3’;R1: 5’-GGGATCACAACAGAGCGG -3’

J2：F2:5’- CATTCCCTTCCGCGCTAGT-3’;R2: 5’- GGCTGCAAGTTCCTGAC -3’。充分利用两种地理种群大黄鱼基因的高频差异位点，同时兼顾引物的二级结构，利用引入错配碱基的方法，设计出的本发明的鉴定引物。设计得到的鉴定引物特异性强， PCR扩增效率高，相较于现有技术，鉴别时间更短，准确率更高。

鉴别岱衢族大黄鱼和闽-粤东族大黄鱼的方法，具体操作步骤：

1）采用标准酚-氯仿法提取大黄鱼总DNA作为模板DNA，琼脂电泳检测DNA质量，紫外分光光度计测定DNA浓度，并设计鉴定引物：

J1：F1:5’- GGCATTTACACACATGGAC-3’;R1: 5’-GGGATCACAACAGAGCGG -3’

J2：F2:5’- CATTCCCTTCCGCGCTAGT-3’;R2: 5’- GGCTGCAAGTTCCTGAC -3’；