[发明专利]一种检测双歧杆菌的培养基及检测方法

说明书

本发明属于微生物检测技术领域，公开了一种检测双歧杆菌的培养基及检测方法。本发明所述检测双歧杆菌的培养基包括基础培养基、乳糖和半胱氨酸盐酸盐；其中，所述基础培养基由哥伦比亚血琼脂基础培养基、棉子糖、氯化锂、丙酸钠和水制成，pH 5.1。本发明所述培养基除了哥伦比亚血琼脂基础培养基外还包括乳糖、棉籽糖和半胱氨酸盐酸盐氯化锂和丙酸钠，同时其中乳糖、棉籽糖和半胱氨酸盐酸盐作为营养剂促进双歧杆菌的生长。采用本发明所述培养基进行双歧杆菌总数检测，双歧杆菌菌落生长大，容易判读，特异性好，且对瑞士乳酸杆菌的有很好的抑制作用，能准确检测双歧杆菌和乳杆菌组合营养品中双歧杆菌的含量。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种检测双歧杆菌的培养基及检测方法，尤其是一种检测双歧杆菌和乳杆菌组合中双歧杆菌的培养基及检测方法。

背景技术

发酵食品中含有丰富的乳酸菌，其可发酵糖产生大量的乳酸，对人体的消化、免疫相关生理功能具有积极的影响。常见的食品乳酸菌包含乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌等几种菌属，常常将它们按照需要进行混合，制备为功能性食品或营养品。然而对这种乳酸菌组合的检测，特别是双歧杆菌的检测目前还没有很准确及特异的方法。对于乳杆菌和双歧杆菌的检测，有国标方法GB4789.35-2016，检验程序如图1所示，对于双歧杆菌总数检测，GB4789.35-2016中使用的莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基并不能准确的检测出双歧杆菌数量，因为乳杆菌也能在该培养基上生长，使得双歧杆菌检出值不准确。而对于GB4789.34-2016中使用的双歧杆菌培养基(BBL培养基)，乳酸杆菌也能在BBL培养基上生长，检测结果包含了乳酸杆菌和双歧杆菌，而不能只代表双歧杆菌。

目前现行常用技术检测的操作程序如下：无菌操作称取1g样品于无菌均质袋中，加入99ml无菌磷酸盐缓冲溶液，于8000r/min-10000r/min均质1min-2min，制成1:10样品菌液；2)用1ml无菌吸管吸取1:10样品菌液1ml，沿管壁缓慢注于装有9ml无菌磷酸盐缓冲溶液的无菌试管中，振摇试管使其混合均匀，制成1:100的样品菌液；3)按上述操作顺序，做10倍递增样品菌液；4)对于双歧杆菌的检测，选择2-3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1ml样品匀液于改良哥伦比亚琼脂培养基平板(哥伦比亚血琼脂基础培养基38克，半胱氨酸盐酸盐0.5克，棉子糖0.5克，氯化锂2克，丙酸钠3克，加入1升蒸馏水中，用6N盐酸调pH到5.1，121℃高压灭菌10分钟)，使用灭菌L型棒进行表面涂布，每个稀释度做2个平板，于36±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数，从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成；5)菌落计数并报告。上述方法对双歧杆菌和乳杆菌组合营养品中双歧杆菌检测特异性比较好，但是对于放置一段时间活菌数下降后的乳酸菌组合中双歧杆菌检测特异性不好，培养基上还是会同时出现乳杆菌和双歧杆菌，不能准确检测双歧杆菌。并且该检测方法菌落生长特别小，难以准确读数，在结果读数时比较困难。因此需要建立一个新的双歧杆菌检测方法，以便能准确、方便的检测双歧杆菌和乳杆菌组合中的双歧杆菌。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种准确、方便的检测双歧杆菌的培养基及方法，以便能准确、方便的检测双歧杆菌和乳杆菌组合中的双歧杆菌。

为实现本发明的目的，本发明公开了如下技术方案：

一种检测双歧杆菌的培养基，包括基础培养基、乳糖和半胱氨酸盐酸盐。

其中，所述基础培养基由哥伦比亚血琼脂基础培养基、棉子糖、氯化锂、丙酸钠和水制成，pH5.1。

作为优选，所述基础培养基中各成分的用量为哥伦比亚血琼脂基础培养基38g/L、棉子糖0.5g/L-1g/L、氯化锂2.5-3.5g/L、丙酸钠4g/L-6g/L，余量为水。

作为优选，本发明所述检测双歧杆菌的培养基中，所述乳糖的终浓度为3v/v％～7v/v％。