[发明专利]一种检测双歧杆菌的培养基及检测方法

权利要求书

1.一种检测双歧杆菌的培养基，其特征在于，由基础培养基、乳糖和半胱氨酸盐酸盐组成；其中，所述基础培养基由哥伦比亚血琼脂基础培养基、棉子糖、氯化锂、丙酸钠和水制成，pH 5.1。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基中各成分的用量为哥伦比亚血琼脂基础培养基38g/L、棉子糖0.5g/L-1g/L、氯化锂2.5-3.5g/L、丙酸钠4g/L-6g/L，余量为水。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述乳糖的终浓度为3v/v％～7v/v％。

4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述半胱氨酸盐酸盐的终浓度为500μg/mL～1000μg/mL。

5.权利要求1所述检测双歧杆菌的培养基的制备方法，其特征在于，分别制备基础培养基、乳糖储备液、半胱氨酸盐酸盐储备液，除菌后将乳糖储备液和半胱氨酸盐酸盐储备液加入冷却的基础培养基中混匀后倾倒平皿。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述基础培养基的制备方法为分别取配方量的哥伦比亚血琼脂基础培养基、棉子糖、氯化锂、丙酸钠和水混匀，调pH值至5.1，高压蒸汽灭菌法除菌；所述乳糖储备液的制备方法为取乳糖加入水中混匀，微孔滤膜过滤除菌；所述半胱氨酸盐酸盐储备液制备方法为取半胱氨酸盐酸盐加入到水中，微孔滤膜过滤除菌。

7.一种检测双歧杆菌的方法，其特征在于，以权利要求1所述的培养基培养待测样品后计数。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法具体为待测样品用无菌磷酸盐缓冲溶液进行梯度稀释，然后选择2-3个连续的稀释度的待测样品菌液，分别吸取0.1mL涂布于权利要求1所述的培养基平板中，于36±1℃、厌氧培养72h±2h后计数平板上的所有菌落数。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的梯度稀释为无菌操作称取10g待测样品于无菌均质袋中，加入90ml无菌磷酸盐缓冲溶液，于8000r/min-10000r/min均质1min-2min，制成1:10待测样品菌液，无菌吸管吸取1:10待测样品菌液1ml，沿管壁缓慢注于装有9ml无菌磷酸盐缓冲溶液的试管中，振摇试管使其混合均匀，制成1:100的待测样品菌液；按上述操作顺序，做10倍递增的梯度稀释；所述的计数具体为记录稀释倍数和相应的菌落数量，菌落计数以菌落形成单位CFU表示，选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数，低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，还包括报告菌落数的步骤，具体为以CFU/g为单位报告，菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告；菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数。