[发明专利]一种鲟鱼显微注射的方法及应用

权利要求书

1.一种鲟鱼显微注射的方法，包括，在鲟鱼卵受精后的二十分钟内向鲟鱼1细胞期受精卵动物极的受精孔中进行显微注射；

所述的受精卵的制备过程包括：挑选性成熟的亲鱼，在室内养殖系统中注射LHRHa和DOM混合物进行人工催产繁殖；注射剂量为10μg LHRHa+1mg DOM/kg体重，每隔12个小时注射1次，雌性鲟鱼共注射2次，雄性鲟鱼注射1次；注射24小时后，分别挤出精液和卵到干燥的烧杯，用0.3×Danieau buffer将精液稀释100倍，进行人工授精，得到鲟鱼1细胞期的受精卵；

所述的Danieau buffer：17mM NaCl，2mM KCl，0.12mM MgSO₄，1.8mM Ca(NO₃)₂，1.5mMHEPES，pH 7.6。

2.根据权利要求1所述的方法，所述的鲟鱼包括小体鲟，西伯利亚鲟(A.baerii)、施氏鲟(A.schrenckii)或俄罗斯鲟(A.gueldenstaedtii)。

3.权利要求1所述的方法在鲟鱼基因转移中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其应用步骤包括，将包含有待转移目的基因片段的质粒，利用显微操作的方式注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵动物极的受精孔中。

5.权利要求1所述的方法在鲟鱼外源基因编辑中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其应用步骤包括：将靶基因质粒和针对靶位点的TALENmRNA，利用显微操作的方式注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵动物极受精孔中。

7.权利要求1所述的方法在鲟鱼内源基因编辑中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其应用步骤包括：将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合后，利用显微注射的方式，注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵的动物极受精孔中。