[发明专利]一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法

说明书

本发明公开了一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其包括如下检测步骤：1)制备标准储备液；2)制备标准工作液Ⅲ；3)牛乳预处理；4)制备标准曲线；5)牛乳待测实样检测。本发明可快速高效准确地定性定量测定牛奶中恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星和二氟沙星的药物残留量，其可广泛应用于牛奶样品中氟喹诺酮类药物残留量的批量检测。

技术领域

本发明涉及药物残留检测领域，特别涉及一种氟喹诺酮类药物残留的检测方法。

背景技术

由于氟喹诺酮类药物(FQs)在动物体内代谢时间较长，环境中不易降解，不可避免地给我们食品安全带来了潜在的危害，因而世界各国为保证食品安全，对氟喹诺酮类药物(FQs)的使用和在食品中的安全限量进行了限制，目前仅在我国、欧盟、日本和中国香港等国家和地区允许有药物残留存在。其中欧盟规定：氟喹诺酮类药物(FQs)在动物肌肉、肝脏和肾脏中残留量不得超过30μg kg-1。为适应国内外的发展，建立灵敏而高效的氟喹诺酮类药物(FQs)检测方法是当务之急。同时由于氟喹诺酮类药物(FQs)在食品中的残留主要以痕量形式存在，因此需要利用富集材料来提高它的浓度，使其在检测样本中的含量达到富集和浓缩的效果，从而用现有的检测手段检测出来就显得非常重要。然而氟喹诺酮类药物(FQs)在水中溶解性很低，在常见的商业ODS固相萃取柱上富集效果不太理想，因此研制出对氟喹诺酮类药物(FQs)具有高吸附容量和高选择性的吸附剂意义重大。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法。

本发明所采取的技术方案是：一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其特征在于，包括如下检测步骤：

1)制备标准储备液：将恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星和二氟沙星制成4种终浓度为1mg/mL的标准储备液；

2)制备标准工作液Ⅲ：取以上4种标准储备液各1mL，用甲醇稀释并定容制备终浓度为100μg/mL标准工作液Ⅰ，取1mL标准工作液Ⅰ用甲醇稀释并定容制备终浓度为10μg/mL的标准工作液Ⅱ，取标准工作液Ⅱ用甲醇稀释制备浓度分别为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL的7种标准工作液Ⅲ，存放于4℃冰箱；

3)牛乳预处理：分别吸取1mL牛乳实样于8支15mL离心管中，再分别加入7种标准工作液Ⅲ，其中一支离心管无添加，后置于旋涡混合器上混合30s，静置30min，加入65μL磷酸和4mL甲醇溶液，继续混合30～60s，经水平振荡30min，静置5min，控制速度为6000r/min的条件下离心处理6min，将上清液转移至15mL离心管中，残渣用65μL磷酸和4mL甲醇溶液的混合溶液再提一次后合并上清液，后再加入4mL正己烷，在1000rpm条件下旋涡混匀，静置5min至分层清晰，弃掉上层正己烷层，对下层剩余物进行78℃水浴处理并空气吹干，得牛乳处理样；

4)制备标准曲线：将步骤3)所得牛乳处理样用1mL流动相溶解后吸出至1.5mL离心管中，在速度为12000r/min条件下离心处理6min，吸取上清液，通过高效液相色谱仪进行色谱分析，求得标准曲线回归方程的线性范围为0.01～1.00μg/mL，相关系数为0.999；

5)牛乳待测实样检测：将牛乳待测实样经预处理后用1mL流动相溶解，吸出至1.5mL离心管中，在速度为12000r/min条件下离心处理6min，吸取上清液至高效液相色谱仪的棕色自动进样瓶中，上机检测，将检测结果与步骤4)所得标准曲线对比，得出药物残留定性定量结果。