[发明专利]一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法

权利要求书

1.一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其特征在于，包括如下检测步骤：

1)制备标准储备液：将恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星和二氟沙星制成4种终浓度为1mg/mL的标准储备液；

2)制备标准工作液Ⅲ：取以上4种标准储备液各1mL，用甲醇稀释并定容制备终浓度为100μg/mL标准工作液Ⅰ，取1mL标准工作液Ⅰ用甲醇稀释并定容制备终浓度为10μg/mL的标准工作液Ⅱ，取标准工作液Ⅱ用甲醇稀释制备浓度分别为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL的7种标准工作液Ⅲ，存放于4℃冰箱；

3)牛乳预处理：分别吸取1mL牛乳实样于8支15mL离心管中，再分别加入7种标准工作液Ⅲ，其中一支离心管无添加，后置于旋涡混合器上混合30s，静置30min，加入65μL磷酸和4mL甲醇溶液，继续混合30～60s，经水平振荡30min，静置5min，控制速度为6000r/min的条件下离心处理6min，将上清液转移至15mL离心管中，残渣用65μL磷酸和4mL甲醇溶液的混合溶液再提一次后合并上清液，后再加入4mL正己烷，在1000rpm条件下旋涡混匀，静置5min至分层清晰，弃掉上层正己烷层，对下层剩余物进行78℃水浴处理并空气吹干，得牛乳处理样；

4)制备标准曲线：将步骤3)所得牛乳处理样用1mL流动相溶解后吸出至1.5mL离心管中，在速度为12000r/min条件下离心处理6min，吸取上清液，通过高效液相色谱仪进行色谱分析，求得标准曲线回归方程的线性范围为0.01～1.00μg/mL，相关系数为0.999；

5)牛乳待测实样检测：将牛乳待测实样经预处理后用1mL流动相溶解，吸出至1.5mL离心管中，在速度为12000r/min条件下离心处理6min，吸取上清液至高效液相色谱仪的棕色自动进样瓶中，上机检测，将检测结果与步骤4)所得标准曲线对比，得出药物残留定性定量结果。

2.根据权利要求1所述的一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其特征在于：步骤5)所述预处理为在离心管中加入65μL磷酸和4mL甲醇溶液的混合溶液，继续混合30～60s，后经水平振荡30min，静置5min，控制速度为6000r/min的条件下离心处理6min，将上清液转移至15mL离心管中，残渣用65μL磷酸和4mL甲醇溶液的混合溶液再提一次后合并上清液，后再加入4mL正己烷，在1000rpm条件下旋涡混匀，静置5min至分层清晰，弃掉上层正己烷层，对下层剩余物进行78℃水浴处理并空气吹干，后用1mL流动相溶解，吸出至1.5mL离心管中，在速度为12000r/min条件下离心处理6min。

3.根据权利要求1或2所述的一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其特征在于：所述流动相为将柠檬酸-乙酸铵混合溶液和乙腈按体积比为85:15混合制成，其中柠檬酸-乙酸铵混合溶液中柠檬酸的浓度为0.05mol/L、乙酸铵的浓度为0.1mol/L。

4.根据权利要求3所述的一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其特征在于：所述柠檬酸-乙酸铵混合溶液中还含有三乙胺。

5.根据权利要求1所述的一种牛乳中氟喹诺酮类药物残留量的检测方法，其特征在于：步骤4)和步骤5)中高效液相色谱仪的色谱条件为4.6×250mm的5μm色谱柱，激发波长为278nm，发射波长为465nm，柱温为40℃，流速为1.0ml/min，进样量为30μL。