[发明专利]一种四肽-21的液相合成方法

说明书

本发明公开了一种四肽‑21的液相合成方法，采用液相合成法分别合成Gly‑Glu和Lys‑Gly的全保护片段Boc‑Gly‑Glu(OtBu)‑OMe、Fmoc‑Lys(Boc)‑Gly‑OH，然后将Fmoc‑Lys(Boc)‑Gly‑OH脱除Fmoc基团后与Boc‑Gly‑Glu(OtBu)‑OMe进行缩合反应生成Boc‑Gly‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Gly‑OH，最后脱除所有保护基团得到H‑Gly‑Glu‑Lys‑Gly‑OH，即四肽‑21。本发明采用液相合成法，所用原料便宜易得，避免了固相合成所用的载体树脂，中间体纯度高、综合成本低廉，对环境友好，适合规模化生产。

技术领域

本发明属于肽的合成技术领域，具体涉及一种四肽-21的液相合成方法。

背景技术

皮肤老化是一个全球性的课题，它导致许多皮肤成分平均水平的改变。这些改变影响真皮细胞外基质的质量表皮内聚力，从而诱导皱纹的产生和皮肤脆弱。四肽-21(序列为H-Gly-Glu-Lys-Gly-OH)是一种四肽酶，存在于一些人的细胞外基质蛋白质中，它的局部应用诱发了皮肤最重要的结构——皮肤成分的恢复。

四肽-21促进胶原蛋白、透明质酸和纤维蛋白增强活性，从而提高皮肤弹性，降低皮肤粗糙度。皮肤被强烈地平滑和固定，各种皱纹的出现被最小化。四肽-21具有高抗衰老潜力，特别适合抗皱纹和抗衰老的眼睛保健。实验表明，与目前市场上类似的化妆品肽如棕榈酰五肽-4相比，10ppm四肽-21优于10ppm棕榈酰五肽-4，作为一种化妆品肽，有着显著的抗衰老潜能。

目前四肽-21的合成方法多为固相多肽合成法，所用树脂价格昂贵，成本较高且不易规模化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效率、低成本、易规模化的四肽-21的液相合成方法。

解决上述问题所采用的技术方案是：采用液相合成法分别合成Gly-Glu的全保护片段Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe和Lys-Gly的全保护片段Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH，然后将Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH脱除Fmoc基团后与Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe进行缩合反应生成Boc-Gly-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gly-OH，最后脱除所有保护基团得到H-Gly-Glu-Lys-Gly-OH，即四肽-21。

上述Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe的合成方法为：以四氢呋喃为溶剂，将Boc-Gly-OH与N,N′-二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺在0～10℃条件下反应2～5小时，过滤，向滤液中加入H-Glu(OtBu)-OMe·HCl和碳酸氢钠水溶液，在0～10℃条件下反应1～2小时后，升至室温反应8～14小时，反应完后分离纯化，得到Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe，其中Boc-Gly-OH、N,N′-二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、H-Glu(OtBu)-OMe·HCl、碳酸氢钠的摩尔比优选1:1.3～1.5:1.1～1.3:1.05～1.10:3.0～4.0。

上述Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH的合成方法为：以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Lys(Boc)-OH与N,N′-二环己基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基乙胺在-5～0℃条件下反应2～4小时，过滤，向滤液中加入H-Gly-OH和有机碱，在0～5℃下反应1～2小时后，升至室温反应8～10小时，反应完后分离纯化，得到Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH，其中Fmoc-Lys(Boc)-OH、N,N′-二环己基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基乙胺、H-Gly-OH、有机碱的摩尔比优选1:1.2～1.5:2.0～3.0:2.0～3.0:1.0～1.3:3.0～4.0，所述的有机碱为N-甲基吗啡啉、N-甲基吡咯烷酮、N,N′-二异丙基乙胺中的任意一种。