[发明专利]一种全细胞催化剂制备芳香醛和/或芳香醇的方法

权利要求书

1.一种全细胞催化剂制备芳香醛和/或芳香醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、基因工程菌的构建，所述基因工程菌能表达阿魏酰CoA合酶和烯酰CoA水合酶，所述阿魏酰CoA合酶的基因和烯酰CoA水合酶的基因均来源于热黄拟无枝酸菌(Amycolatopsis thermoflava )N1165；

步骤二、利用所述步骤一构建的基因工程菌制备全细胞催化剂；

步骤三、通过温度控制所述步骤二获得的全细胞催化剂与肉桂酸衍生物反应生成芳香醛和/或芳香醇，其中，所述反应温度为30℃时，生成的芳香醇的量多于生成的芳香醛的量；所述反应温度为50℃时，生成的芳香醛的量多于生成的芳香醇的量。

2.如权利要求1所述的全细胞催化剂制备芳香醛和/或芳香醇的方法，其特征在于，所述步骤一具体为：

1)以所述热黄拟无枝酸菌(Amycolatopsis thermoflava )N1165基因组为模板，fcs-F和fcs-R为引物，PCR扩增所述阿魏酰CoA合酶基因片段；以及以所述热黄拟无枝酸菌(Amycolatopsis thermoflava)N1165基因组为模板，ech-F和ech-R为引物，PCR扩增所述烯酰CoA水合酶基因片段；电泳，切胶回收所述阿魏酰CoA合酶基因片段和所述烯酰CoA水合酶基因片段；fcs-F：5′-catgcatatgctcaatcacggtttggg-3′，fcs-R：5′-catgctcgagttacccgtagagttcgcggat-3′；ech-F：5′-catgggatccgatggggcagagcgccg-3′，ech-R：5′-catgaagcttttacttggccggatcgaagg-3′；

2)从含有pETDuet-1质粒的大肠杆菌Trans1-T1中提取pETDuet-1质粒；酶切pETDuet-1质粒、所述阿魏酰CoA合酶基因片段和所述烯酰CoA水合酶基因片段，用T4 DNA连接酶进行连接；获得重组质粒pETDuet-fcs-ech；

3)将所述重组质粒pETDuet-fcs-ech转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中；通过涂布含氨苄青霉素的固体培养基获得单菌落并培养获得所述基因工程菌。

3.如权利要求1所述的全细胞催化剂制备芳香醛和/或芳香醇的方法，其特征在于，所述步骤二具体为：

I、培养所述基因工程菌；

II、用IPTG诱导经培养后的基因工程菌的蛋白表达；

III、将诱导表达后的菌液离心收集菌体，用磷酸盐缓冲液洗涤菌体后，用磷酸盐缓冲液重悬菌体，获得所述全细胞催化剂。

4.如权利要求1所述的全细胞催化剂制备芳香醛和/或芳香醇的方法，其特征在于，还包括步骤四、将所述步骤三生成的含有芳香醛和/或芳香醇的反应液用盐酸调节pH至2或2以下，加入乙酸丁酯，混合，静置，离心，收集上层液体，蒸发得到芳香醛粉末和/或芳香醇粉末。

5.一种全细胞催化剂，其特征在于，包含能表达阿魏酰CoA合酶和烯酰CoA水合酶的大肠杆菌基因工程菌，且所述阿魏酰CoA合酶的基因和烯酰CoA水合酶的基因均来源于热黄拟无枝酸菌(Amycolatopsis thermoflava )N1165。

6.如权利要求5所述的全细胞催化剂的构建方法，其特征在于，包括权利要求1中的步骤一和步骤二。